中国计划生育学杂志
中國計劃生育學雜誌
중국계화생육학잡지
CHINESE JOURNAL OF FAMILY PLANNING
2013年
4期
231-233
,共3页
莫毅%梁方方%陈月凤%江如兰%叶健%谢丹尼
莫毅%樑方方%陳月鳳%江如蘭%葉健%謝丹尼
막의%량방방%진월봉%강여란%협건%사단니
卵泡抑素基因%RNA干扰%小发夹RNA
卵泡抑素基因%RNA榦擾%小髮夾RNA
란포억소기인%RNA간우%소발협RNA
目的:构建人卵泡抑素(FS)基因短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,并瞬时转染方式初步鉴定其干扰效果.方法:依据GenBank数据库提供的人FS基因mRNA核苷酸序列,利用Ambion网站上siRNA软件设计shRNA干扰靶序列,将该序列克隆到线性化的pLKO.1质粒载体上,构建pLKO.1-FS-shRNA重组质粒,并进行酶切和测序鉴定.确认质粒构建成功后,用脂质体(LipofectamineTM2000)将重组质粒瞬时转染3AO人卵巢癌细胞系,并用实时定量反转录PCR法检测重组质粒对FS基因的表达抑制效果.结果:构建的shRNA序列经DNA测序证实与设计序列完全一致；实时定量反转录PCR结果显示pLKO.1-FS-shRNA重组质粒瞬时转染的3AO人卵巢癌细胞后,细胞中的FS基因转录受到抑制,抑制率达59％.结论:成功构建了靶向人FS基因的shRNA干扰靶序列重组质粒(PLKO.1-FS-shRNA),转染后对人卵巢癌细胞系FS基因的表达具抑制效果,该实验为进一步研究FS基因的生物学功能奠定基础.
目的:構建人卵泡抑素(FS)基因短髮夾RNA(shRNA)真覈錶達質粒,併瞬時轉染方式初步鑒定其榦擾效果.方法:依據GenBank數據庫提供的人FS基因mRNA覈苷痠序列,利用Ambion網站上siRNA軟件設計shRNA榦擾靶序列,將該序列剋隆到線性化的pLKO.1質粒載體上,構建pLKO.1-FS-shRNA重組質粒,併進行酶切和測序鑒定.確認質粒構建成功後,用脂質體(LipofectamineTM2000)將重組質粒瞬時轉染3AO人卵巢癌細胞繫,併用實時定量反轉錄PCR法檢測重組質粒對FS基因的錶達抑製效果.結果:構建的shRNA序列經DNA測序證實與設計序列完全一緻；實時定量反轉錄PCR結果顯示pLKO.1-FS-shRNA重組質粒瞬時轉染的3AO人卵巢癌細胞後,細胞中的FS基因轉錄受到抑製,抑製率達59％.結論:成功構建瞭靶嚮人FS基因的shRNA榦擾靶序列重組質粒(PLKO.1-FS-shRNA),轉染後對人卵巢癌細胞繫FS基因的錶達具抑製效果,該實驗為進一步研究FS基因的生物學功能奠定基礎.
목적:구건인란포억소(FS)기인단발협RNA(shRNA)진핵표체질립,병순시전염방식초보감정기간우효과.방법:의거GenBank수거고제공적인FS기인mRNA핵감산서렬,이용Ambion망참상siRNA연건설계shRNA간우파서렬,장해서렬극륭도선성화적pLKO.1질립재체상,구건pLKO.1-FS-shRNA중조질립,병진행매절화측서감정.학인질립구건성공후,용지질체(LipofectamineTM2000)장중조질립순시전염3AO인란소암세포계,병용실시정량반전록PCR법검측중조질립대FS기인적표체억제효과.결과:구건적shRNA서렬경DNA측서증실여설계서렬완전일치；실시정량반전록PCR결과현시pLKO.1-FS-shRNA중조질립순시전염적3AO인란소암세포후,세포중적FS기인전록수도억제,억제솔체59％.결론:성공구건료파향인FS기인적shRNA간우파서렬중조질립(PLKO.1-FS-shRNA),전염후대인란소암세포계FS기인적표체구억제효과,해실험위진일보연구FS기인적생물학공능전정기출.
