CAJ | 학술논문

目的:采用地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C3种物质作为诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化的基本辅剂,定向诱导犬第2代BMSCs,探讨BMSCs向成骨细胞分化的潜能和成骨细胞的特征性鉴定方法.方法:无菌条件下行犬髂骨穿刺,采集骨髓15～ 20 mL,全骨髓10％ FBS DMEM培养液进行原代培养.将第2代纯化的BMSCs细胞悬液(调整细胞密度为1×105/mL)接种于含地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C的DMEM/FI2培养液的培养瓶(皿)中,体外扩增培养、传代.对细胞形态特征进行观察；行碱性磷酸酶(ALP)染色,骨桥素以及Ⅰ型胶原相关蛋白免疫荧光化学检测鉴定细胞性质.结果:原代培养的BMSCs形态呈长梭形或不规则形,呈均匀分布生长.诱导分化后的细胞形态呈长梭形或不规则形,呈均匀分布生长,传代后细胞体积略变大;BMSCs成骨诱导增殖后电镜下细胞呈多边形,可见ALP染色阳性；经成骨细胞诱导培养14 d后,细胞骨桥素以及Ⅰ型胶原相关蛋白表达阳性.结论:BMSCs易于体外分离培养及扩增,地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C体外定向诱导能够在短时间内获得大量成骨细胞,且所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能.
목적:채용지새미송、β-린산감유화유생소C3충물질작위유도골수간충질간세포(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)향성골세포분화적기본보제,정향유도견제2대BMSCs,탐토BMSCs향성골세포분화적잠능화성골세포적특정성감정방법.방법:무균조건하행견가골천자,채집골수15～ 20 mL,전골수10％ FBS DMEM배양액진행원대배양.장제2대순화적BMSCs세포현액(조정세포밀도위1×105/mL)접충우함지새미송、β-린산감유화유생소C적DMEM/FI2배양액적배양병(명)중,체외확증배양、전대.대세포형태특정진행관찰；행감성린산매(ALP)염색,골교소이급Ⅰ형효원상관단백면역형광화학검측감정세포성질.결과:원대배양적BMSCs형태정장사형혹불규칙형,정균균분포생장.유도분화후적세포형태정장사형혹불규칙형,정균균분포생장,전대후세포체적략변대;BMSCs성골유도증식후전경하세포정다변형,가견ALP염색양성；경성골세포유도배양14 d후,세포골교소이급Ⅰ형효원상관단백표체양성.결론:BMSCs역우체외분리배양급확증,지새미송、β-린산감유화유생소C체외정향유도능구재단시간내획득대량성골세포,차소배양적세포구유전형적성골세포형태화공능.