中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2014年
2期
88-94
,共7页
姚亚男%黄宇虹%王娟%陈伊%任亮亮%赖小敏
姚亞男%黃宇虹%王娟%陳伊%任亮亮%賴小敏
요아남%황우홍%왕연%진이%임량량%뢰소민
结核多肽%HLA-DR%人工抗原递呈细胞%CD4+T 细胞%TCR四聚体
結覈多肽%HLA-DR%人工抗原遞呈細胞%CD4+T 細胞%TCR四聚體
결핵다태%HLA-DR%인공항원체정세포%CD4+T 세포%TCR사취체
Mycobacterium tuberculosis peptide%HLA-DR%Artificial APCs%CD4+T cell%TCR tetramer
目的应用不同的 MTB 多肽以及不同的 HLA-DR 基因构建的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR 复合物的 S2恒定细胞株，即人工 APC 筛选、鉴定结核特异性 CD4+α/βTCR 四聚体。<br> 方法以 PE 标记的 CD4+α/βTCR 四聚体、FITC 标记的抗 HLA-DR 抗体（L243），分别与未诱导表达或 CuSO4诱导表达后的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR 的果蝇 S2恒定细胞株，以及与无多肽或结合有结核多肽的、表达HLA-DR 的 S2细胞株共孵育，流式细胞技术检测分析TCR 四聚体与各种细胞株结合率的差异。<br> 结果 TCR 四聚体6M、6N 均与2#细胞株，即C5/HLA-DRB1*0404（1.73%、5.93%）等具有较高的阳性结合率；结核抗原肽孵育后，一些人工 APC 的四聚体阳性结合率有所提高；所筛选的9个 TCR 四聚体均与2#细胞株有较高的结合率。<br> 结论膜表达结核抗原肽/HLA-DR 的 S2细胞株，可以应用于结核特异性 CD4+α/βTCR 四聚体的筛选、鉴定；构建的9个 CD4+α/βTCR 四聚体均为结核特异性。
目的應用不同的 MTB 多肽以及不同的 HLA-DR 基因構建的膜錶麵錶達結覈抗原肽/HLA-DR 複閤物的 S2恆定細胞株，即人工 APC 篩選、鑒定結覈特異性 CD4+α/βTCR 四聚體。<br> 方法以 PE 標記的 CD4+α/βTCR 四聚體、FITC 標記的抗 HLA-DR 抗體（L243），分彆與未誘導錶達或 CuSO4誘導錶達後的膜錶麵錶達結覈抗原肽/HLA-DR 的果蠅 S2恆定細胞株，以及與無多肽或結閤有結覈多肽的、錶達HLA-DR 的 S2細胞株共孵育，流式細胞技術檢測分析TCR 四聚體與各種細胞株結閤率的差異。<br> 結果 TCR 四聚體6M、6N 均與2#細胞株，即C5/HLA-DRB1*0404（1.73%、5.93%）等具有較高的暘性結閤率；結覈抗原肽孵育後，一些人工 APC 的四聚體暘性結閤率有所提高；所篩選的9箇 TCR 四聚體均與2#細胞株有較高的結閤率。<br> 結論膜錶達結覈抗原肽/HLA-DR 的 S2細胞株，可以應用于結覈特異性 CD4+α/βTCR 四聚體的篩選、鑒定；構建的9箇 CD4+α/βTCR 四聚體均為結覈特異性。
목적응용불동적 MTB 다태이급불동적 HLA-DR 기인구건적막표면표체결핵항원태/HLA-DR 복합물적 S2항정세포주，즉인공 APC 사선、감정결핵특이성 CD4+α/βTCR 사취체。<br> 방법이 PE 표기적 CD4+α/βTCR 사취체、FITC 표기적항 HLA-DR 항체（L243），분별여미유도표체혹 CuSO4유도표체후적막표면표체결핵항원태/HLA-DR 적과승 S2항정세포주，이급여무다태혹결합유결핵다태적、표체HLA-DR 적 S2세포주공부육，류식세포기술검측분석TCR 사취체여각충세포주결합솔적차이。<br> 결과 TCR 사취체6M、6N 균여2#세포주，즉C5/HLA-DRB1*0404（1.73%、5.93%）등구유교고적양성결합솔；결핵항원태부육후，일사인공 APC 적사취체양성결합솔유소제고；소사선적9개 TCR 사취체균여2#세포주유교고적결합솔。<br> 결론막표체결핵항원태/HLA-DR 적 S2세포주，가이응용우결핵특이성 CD4+α/βTCR 사취체적사선、감정；구건적9개 CD4+α/βTCR 사취체균위결핵특이성。
Objective To screen and identify MTB antigen-specific CD4+ α/β TCR tetramers using different membrane expressing MTB antigen peptide/HLA-DR complex cell strains (artificial APCs). <br> Methods PE labeled CD4+α/β TCR tetramers and FITC labeled anti-HLA-DR antibody (L243) were incubated with membrane expressing MTB antigen peptide/HLA-DR cell strains (before and after induction) or S2 cell strains expressing only HLA-DR or HLA-DR binding with MTB peptides E6, E7, C5, C14 or tumor peptide respectively, and then different binding capacity of TCR tetramers were detect and analyzed by flow cytometry. <br> Results Both TCR tetramers 6M and 6N showed a high positive rate with No. 2 cell strain (C5/HLA-DRB1*0404, 1.73% and 5.93%respectively). After incubation with MTB peptide, the percentage of tetramer positive rate increased in some of the artificial APCs, and high affinity was observed between all of the nine TCR tetramers and No. 2 cell strain respectively. <br> Conclusion Membrane expressing MTB antigen peptide/HLA-DR complex cell strains could be used to screen and identify MTB-specific CD4+α/βTCR tetramers, and all of the nine tested TCR tetramers are MTB-specific.
