中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2014年
2期
81-87
,共7页
高钺%刘舒云%黄靖香%郭维民%陈继凤%张莉%赵斌%彭江%汪爱媛%王玉%许文静%卢世璧%郭全义
高鉞%劉舒雲%黃靖香%郭維民%陳繼鳳%張莉%趙斌%彭江%汪愛媛%王玉%許文靜%盧世璧%郭全義
고월%류서운%황정향%곽유민%진계봉%장리%조빈%팽강%왕애원%왕옥%허문정%로세벽%곽전의
细胞外基质%软骨%软骨细胞%组织工程%细胞增殖
細胞外基質%軟骨%軟骨細胞%組織工程%細胞增殖
세포외기질%연골%연골세포%조직공정%세포증식
Extracellular matrix%Cartilage%Chondrocytes%Tissue engineering%Cell proliferation
目的观察人脱细胞软骨细胞外基质（hACAM）对异种兔软骨种子细胞增殖和表型的影响。<br> 方法将差速梯度离心法制作的人脱细胞软骨细胞外基质，配制成0.5%的浆料，分别铺于6孔细胞培养板和96孔细胞培养板，形成1 mm 厚的薄膜，以此培养板为实验组。空白对照组培养板仅使用单纯培养液培养。在培养板上培养兔关节软骨细胞。通过 hochest33258染色验证人软骨细胞外基质脱细胞完全与否；分别在第5、15天两个时间点，通过倒置显微镜、甲苯胺蓝染色观察两种培养方法的兔软骨细胞的生长形态、细胞表型和增殖情况，用 CCK-8细胞增殖实验比较两种培养方法在第1、3、7、10天的增殖情况。结果通过 hochest33258染色发现差速梯度离心的人软骨细胞外基质脱细胞完全。通过倒置显微镜观察第5和15天的实验组细胞增殖情况优于空白对照组，甲苯胺蓝染色的结果也证明这个观点；CCK-8细胞增殖试验显示第7天hACAM 组在细胞增殖方面明显地优于单纯培养液的对照组（P=0.0298），hACAM 组的软骨细胞与空白组的软骨细胞在第10天的增殖情况相比没有统计学差异。<br> 结论 hACAM 免疫原性低，无细胞毒性，能够很好地促进异种软骨细胞的增殖。
目的觀察人脫細胞軟骨細胞外基質（hACAM）對異種兔軟骨種子細胞增殖和錶型的影響。<br> 方法將差速梯度離心法製作的人脫細胞軟骨細胞外基質，配製成0.5%的漿料，分彆鋪于6孔細胞培養闆和96孔細胞培養闆，形成1 mm 厚的薄膜，以此培養闆為實驗組。空白對照組培養闆僅使用單純培養液培養。在培養闆上培養兔關節軟骨細胞。通過 hochest33258染色驗證人軟骨細胞外基質脫細胞完全與否；分彆在第5、15天兩箇時間點，通過倒置顯微鏡、甲苯胺藍染色觀察兩種培養方法的兔軟骨細胞的生長形態、細胞錶型和增殖情況，用 CCK-8細胞增殖實驗比較兩種培養方法在第1、3、7、10天的增殖情況。結果通過 hochest33258染色髮現差速梯度離心的人軟骨細胞外基質脫細胞完全。通過倒置顯微鏡觀察第5和15天的實驗組細胞增殖情況優于空白對照組，甲苯胺藍染色的結果也證明這箇觀點；CCK-8細胞增殖試驗顯示第7天hACAM 組在細胞增殖方麵明顯地優于單純培養液的對照組（P=0.0298），hACAM 組的軟骨細胞與空白組的軟骨細胞在第10天的增殖情況相比沒有統計學差異。<br> 結論 hACAM 免疫原性低，無細胞毒性，能夠很好地促進異種軟骨細胞的增殖。
목적관찰인탈세포연골세포외기질（hACAM）대이충토연골충자세포증식화표형적영향。<br> 방법장차속제도리심법제작적인탈세포연골세포외기질，배제성0.5%적장료，분별포우6공세포배양판화96공세포배양판，형성1 mm 후적박막，이차배양판위실험조。공백대조조배양판부사용단순배양액배양。재배양판상배양토관절연골세포。통과 hochest33258염색험증인연골세포외기질탈세포완전여부；분별재제5、15천량개시간점，통과도치현미경、갑분알람염색관찰량충배양방법적토연골세포적생장형태、세포표형화증식정황，용 CCK-8세포증식실험비교량충배양방법재제1、3、7、10천적증식정황。결과통과 hochest33258염색발현차속제도리심적인연골세포외기질탈세포완전。통과도치현미경관찰제5화15천적실험조세포증식정황우우공백대조조，갑분알람염색적결과야증명저개관점；CCK-8세포증식시험현시제7천hACAM 조재세포증식방면명현지우우단순배양액적대조조（P=0.0298），hACAM 조적연골세포여공백조적연골세포재제10천적증식정황상비몰유통계학차이。<br> 결론 hACAM 면역원성저，무세포독성，능구흔호지촉진이충연골세포적증식。
Objective To observe the proliferation of rabbit chondrocytes on human articular cartilage acellular matrix (hACAM) during in vitro expansion. <br> Methods hACAM was prepared with the differential centrifugation as 0.5%slurry, and then coated the 6-well and 96-well plate to form 1 mm thick film as the experimental group. There was no any process for the control group. Chondrocytes were isolated from articular cartilage of New Zealand white rabbits and cultured on hACAM-coated plates hochest33258 staining was used to verify no cell in the hACAM. The cell proliferation and morphology were analyzed with an inverted microscope, toluidine blue staining, and Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay. <br> Results The cells of hACAM groups grew faster than that of the control groups under the inverted microscope in d5, d15, which was also proved by the results of toluidine blue staining. The cells of hACAM groups proliferated significantly faster than that of the control groups (P=0.0298<0.05) in d7. The experiment groups and the control groups were not statistically significant difference in proliferation (P=0.1322>0.05) by CCK-8 cell proliferation assay in d10. <br> Conclusion hACAM promotes the proliferation of chondrocytes at low immunogenicity and no cytotoxic effects, and then it is used as an ideal biological material.
