西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2014年
3期
444-448
,共5页
周波%彭丹%张琳%谭晓风%刘选明
週波%彭丹%張琳%譚曉風%劉選明
주파%팽단%장림%담효풍%류선명
SsSAD基因%pCold TF%原核表达%融合蛋白%纯化
SsSAD基因%pCold TF%原覈錶達%融閤蛋白%純化
SsSAD기인%pCold TF%원핵표체%융합단백%순화
SsSAD(Sapium sebiferum stearoyl-ACP desaturase) gene%pCold TF%prokaryotic expression%fusion protein%purification
乌桕是一种重要的木本油料树种.SAD(stearoyl-acyl ACP desaturase)是油料植物中将饱和脂肪酸转变成不饱和脂肪酸的一种关键脱氢酶.为了进一步揭示乌桕SsSAD的功能,该研究在大肠杆菌中表达了该蛋白.结果表明:(1)通过RT-PCR的方法从乌桕种子中克隆出了SsSAD基因编码区全长序列,并将其克隆到低温诱导的原核表达载体pCold TF上,构建原核重组表达载体pCold TF/SsSAD,转化大肠杆菌BL 21 star (DE3)并获得原核表达工程菌株.(2)通过IPTG法低温诱导表达融合蛋白.该重组质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,融合蛋白分子质量约为101 kD,且在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化和Western blotting检测证实获得了重组蛋白,上述结果为进一步研究乌桕SsSAD的结构和功能奠定了基础.
烏桕是一種重要的木本油料樹種.SAD(stearoyl-acyl ACP desaturase)是油料植物中將飽和脂肪痠轉變成不飽和脂肪痠的一種關鍵脫氫酶.為瞭進一步揭示烏桕SsSAD的功能,該研究在大腸桿菌中錶達瞭該蛋白.結果錶明:(1)通過RT-PCR的方法從烏桕種子中剋隆齣瞭SsSAD基因編碼區全長序列,併將其剋隆到低溫誘導的原覈錶達載體pCold TF上,構建原覈重組錶達載體pCold TF/SsSAD,轉化大腸桿菌BL 21 star (DE3)併穫得原覈錶達工程菌株.(2)通過IPTG法低溫誘導錶達融閤蛋白.該重組質粒在大腸桿菌中得到瞭高效錶達,融閤蛋白分子質量約為101 kD,且在上清液和包涵體中均有錶達,可溶性部分經親和層析純化和Western blotting檢測證實穫得瞭重組蛋白,上述結果為進一步研究烏桕SsSAD的結構和功能奠定瞭基礎.
오구시일충중요적목본유료수충.SAD(stearoyl-acyl ACP desaturase)시유료식물중장포화지방산전변성불포화지방산적일충관건탈경매.위료진일보게시오구SsSAD적공능,해연구재대장간균중표체료해단백.결과표명:(1)통과RT-PCR적방법종오구충자중극륭출료SsSAD기인편마구전장서렬,병장기극륭도저온유도적원핵표체재체pCold TF상,구건원핵중조표체재체pCold TF/SsSAD,전화대장간균BL 21 star (DE3)병획득원핵표체공정균주.(2)통과IPTG법저온유도표체융합단백.해중조질립재대장간균중득도료고효표체,융합단백분자질량약위101 kD,차재상청액화포함체중균유표체,가용성부분경친화층석순화화Western blotting검측증실획득료중조단백,상술결과위진일보연구오구SsSAD적결구화공능전정료기출.
