药学与临床研究
藥學與臨床研究
약학여림상연구
PHARMACEUTICAL AND CLINICAL RESEARCH
2014年
1期
15-19
,共5页
TAT-nNOS1-133%分离纯化%脑卒中%重组蛋白
TAT-nNOS1-133%分離純化%腦卒中%重組蛋白
TAT-nNOS1-133%분리순화%뇌졸중%중조단백
TAT-nNOS1-133%Purification%Stroke%Recombinant protein
目的:表达、纯化有活性的TAT-nNOS1-133重组蛋白,并初步验证其神经保护作用;为开发新神经保护药物提供理论基础.方法:通过PCR、酶切和酶连的方法构建pET28a-TAT-nNOS1-133重组质粒,并转化入大肠杆菌中表达.表达产物经洗涤、复性、阴离子交换柱(DEAE-52)、超滤纯化并除盐.通过FITC标记目的蛋白评价其能否进入细胞,并通过检测细胞凋亡评价TAT-nNOS1-133对谷氨酸诱导的兴奋性毒性的保护作用.结果:获得了较高纯度的TAT-nNOS1-133重组蛋白,经SDS-PAGE电泳显示相对分子质量在17 kD附近有单一条带,且与理论分子质量一致.TAT-nNOS1-133可以进入神经细胞,并减少了谷氨酸诱导的PI阳性细胞数增多.结论:成功构建了TAT-nNOS1-133的原核表达系统并建立了其分离纯化方案.TAT-nNOS1-133可以进入细胞并且减轻了脑卒中病理模型谷氨酸诱导的兴奋性毒性.
目的:錶達、純化有活性的TAT-nNOS1-133重組蛋白,併初步驗證其神經保護作用;為開髮新神經保護藥物提供理論基礎.方法:通過PCR、酶切和酶連的方法構建pET28a-TAT-nNOS1-133重組質粒,併轉化入大腸桿菌中錶達.錶達產物經洗滌、複性、陰離子交換柱(DEAE-52)、超濾純化併除鹽.通過FITC標記目的蛋白評價其能否進入細胞,併通過檢測細胞凋亡評價TAT-nNOS1-133對穀氨痠誘導的興奮性毒性的保護作用.結果:穫得瞭較高純度的TAT-nNOS1-133重組蛋白,經SDS-PAGE電泳顯示相對分子質量在17 kD附近有單一條帶,且與理論分子質量一緻.TAT-nNOS1-133可以進入神經細胞,併減少瞭穀氨痠誘導的PI暘性細胞數增多.結論:成功構建瞭TAT-nNOS1-133的原覈錶達繫統併建立瞭其分離純化方案.TAT-nNOS1-133可以進入細胞併且減輕瞭腦卒中病理模型穀氨痠誘導的興奮性毒性.
목적:표체、순화유활성적TAT-nNOS1-133중조단백,병초보험증기신경보호작용;위개발신신경보호약물제공이론기출.방법:통과PCR、매절화매련적방법구건pET28a-TAT-nNOS1-133중조질립,병전화입대장간균중표체.표체산물경세조、복성、음리자교환주(DEAE-52)、초려순화병제염.통과FITC표기목적단백평개기능부진입세포,병통과검측세포조망평개TAT-nNOS1-133대곡안산유도적흥강성독성적보호작용.결과:획득료교고순도적TAT-nNOS1-133중조단백,경SDS-PAGE전영현시상대분자질량재17 kD부근유단일조대,차여이론분자질량일치.TAT-nNOS1-133가이진입신경세포,병감소료곡안산유도적PI양성세포수증다.결론:성공구건료TAT-nNOS1-133적원핵표체계통병건립료기분리순화방안.TAT-nNOS1-133가이진입세포병차감경료뇌졸중병리모형곡안산유도적흥강성독성.
