石河子大学学报（自然科学版）
石河子大學學報（自然科學版）
석하자대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHIHEZI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2013年
1期
39-42
,共4页
崔茹鹏%沈文%鲁海富%孙延鸣
崔茹鵬%瀋文%魯海富%孫延鳴
최여붕%침문%로해부%손연명
绵羊%ISG15基因%克隆%表达
綿羊%ISG15基因%剋隆%錶達
면양%ISG15기인%극륭%표체
为了克隆并表达绵羊ISG15,且对其表达产物进行纯化,首先从绵羊外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增出ISG15的基因；再通过基因克隆技术,构建ISG15在pET28a中的重组表达质粒pET28a-ISG15,在大肠杆菌BL21 (DE3)用IPTG进行诱导表达,得到ISG15的原核表达蛋白；最后采用Ni2+-NTA亲和层析方法纯化目的蛋白.结果显示:克隆的绵羊ISG15基因序列长度为541 bp,编码157个氨基酸.重组表达产物通过SDS-PAGE可检测到相对分子质量为25 ku的重组蛋白,且表达的目的蛋白能被Ni2+-NTA亲和层析方法所纯化.该研究为后续深入研究绵羊ISG15奠定基础.
為瞭剋隆併錶達綿羊ISG15,且對其錶達產物進行純化,首先從綿羊外週血單覈細胞(PBMC)中提取總RNA,通過逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR),擴增齣ISG15的基因；再通過基因剋隆技術,構建ISG15在pET28a中的重組錶達質粒pET28a-ISG15,在大腸桿菌BL21 (DE3)用IPTG進行誘導錶達,得到ISG15的原覈錶達蛋白；最後採用Ni2+-NTA親和層析方法純化目的蛋白.結果顯示:剋隆的綿羊ISG15基因序列長度為541 bp,編碼157箇氨基痠.重組錶達產物通過SDS-PAGE可檢測到相對分子質量為25 ku的重組蛋白,且錶達的目的蛋白能被Ni2+-NTA親和層析方法所純化.該研究為後續深入研究綿羊ISG15奠定基礎.
위료극륭병표체면양ISG15,차대기표체산물진행순화,수선종면양외주혈단핵세포(PBMC)중제취총RNA,통과역전록취합매련식반응(RT-PCR),확증출ISG15적기인；재통과기인극륭기술,구건ISG15재pET28a중적중조표체질립pET28a-ISG15,재대장간균BL21 (DE3)용IPTG진행유도표체,득도ISG15적원핵표체단백；최후채용Ni2+-NTA친화층석방법순화목적단백.결과현시:극륭적면양ISG15기인서렬장도위541 bp,편마157개안기산.중조표체산물통과SDS-PAGE가검측도상대분자질량위25 ku적중조단백,차표체적목적단백능피Ni2+-NTA친화층석방법소순화.해연구위후속심입연구면양ISG15전정기출.
