CAJ | 학술논문

为了探讨鸡肠上皮原代细胞分离培养方法,进一步研究人源志贺菌对鸡的致病性和为相关侵袭特性提供体外模型,分别取不同日龄鸡胚,用0.1 g/mLⅠ型中性蛋白酶和300 U/mLⅪ型胶原酶联合分离纯化鸡肠上皮原代细胞,筛选其最佳培养方法,并对培养细胞进行鉴定；然后采用0.125％胰酶和0.01％ EDTA联合消化进行鸡肠上皮原代细胞传代.结果显示,应用Ⅰ型中性蛋白酶和Ⅺ型胶原酶消化15日龄鸡胚肠组织可获得满意的肠上皮细胞分离效果,细胞贴壁性良好.培养出圆形或多角形单层生长呈“铺路石样”的细胞,培养的细胞在12 h内贴壁,24 ～48 h明显增殖,72 h后细胞增殖速度减慢,生长状况不良.经透射电镜观察鉴定为肠上皮细胞.且传代后细胞贴壁生长良好.建立的鸡肠上皮原代细胞分离培养方法可获得纯度较高的鸡肠上皮原代细胞,制备的细胞可以连续传代3次.
위료탐토계장상피원대세포분리배양방법,진일보연구인원지하균대계적치병성화위상관침습특성제공체외모형,분별취불동일령계배,용0.1 g/mLⅠ형중성단백매화300 U/mLⅪ형효원매연합분리순화계장상피원대세포,사선기최가배양방법,병대배양세포진행감정；연후채용0.125％이매화0.01％ EDTA연합소화진행계장상피원대세포전대.결과현시,응용Ⅰ형중성단백매화Ⅺ형효원매소화15일령계배장조직가획득만의적장상피세포분리효과,세포첩벽성량호.배양출원형혹다각형단층생장정“포로석양”적세포,배양적세포재12 h내첩벽,24 ～48 h명현증식,72 h후세포증식속도감만,생장상황불량.경투사전경관찰감정위장상피세포.차전대후세포첩벽생장량호.건립적계장상피원대세포분리배양방법가획득순도교고적계장상피원대세포,제비적세포가이련속전대3차.