CAJ | 학술논문

目的:构建穿膜肽KGF-2(TAT-KGF-2),研究其对人角质形成细胞HaCaT的增殖作用.方法:采用普通PCR技术和特殊引物从人胚胎肺成纤维细胞cDNA中扩增出目的基因TAT-KGF-2,并将其插入pET-28a(+)载体中构建pET28a-TAT-KGF-2重组质粒；将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白TAT-KGF-2;通过Ni-NTA柱纯化获得目标重组蛋白并利用Western blot进行鉴定；MTT法研究TAT-KGF-2对HaCa的增殖作用.结果:成功构建pET28a-TAT-KGF-2重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的人KGF-2基因序列同源性达到100％；获得穿膜肽KGF-2蛋白,分子量约为19 kDa,纯度达到95％以上；TAT-KGF-2对HaCaT在12.5 ng/ml时具有增殖作用,并呈浓度依赖性,而且与不具有穿膜功能的KGF-2相比有更强的增殖效果.结论:成功纯化出TAT-KGF-2蛋白,并验证其对HaCaT具有增殖作用,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础.
목적:구건천막태KGF-2(TAT-KGF-2),연구기대인각질형성세포HaCaT적증식작용.방법:채용보통PCR기술화특수인물종인배태폐성섬유세포cDNA중확증출목적기인TAT-KGF-2,병장기삽입pET-28a(+)재체중구건pET28a-TAT-KGF-2중조질립；장해질립전화대장간균Rosetta(DE3),IPTG유도표체중조단백TAT-KGF-2;통과Ni-NTA주순화획득목표중조단백병이용Western blot진행감정；MTT법연구TAT-KGF-2대HaCa적증식작용.결과:성공구건pET28a-TAT-KGF-2중조질립,경서렬비대,여GenBank상공포적인KGF-2기인서렬동원성체도100％；획득천막태KGF-2단백,분자량약위19 kDa,순도체도95％이상；TAT-KGF-2대HaCaT재12.5 ng/ml시구유증식작용,병정농도의뢰성,이차여불구유천막공능적KGF-2상비유경강적증식효과.결론:성공순화출TAT-KGF-2단백,병험증기대HaCaT구유증식작용,위진일보연구해단백적결구화공능전정료기출.