生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2013年
1期
22-25
,共4页
李军明%林衡%葛高顺%张立超%于昉%胡学军
李軍明%林衡%葛高順%張立超%于昉%鬍學軍
리군명%림형%갈고순%장립초%우방%호학군
C-反应蛋白%毕赤酵母%组成型表达%免疫反应性
C-反應蛋白%畢赤酵母%組成型錶達%免疫反應性
C-반응단백%필적효모%조성형표체%면역반응성
目的:构建组成型表达重组人C-反应蛋白(Recombinant humanC-reactive protein,rhCRP)的毕赤酵母工程菌株,表达、纯化rhCRP并鉴定其免疫反应性.方法:将设计合成的rhCRP基因克隆到表达载体pGAPZαA上并转化至毕赤酵母X-33中进行组成型分泌表达,通过His亲和层析柱纯化rhCRP.分别采用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA法检测目的蛋白并鉴定其免疫反应性.结果:重组表达载体pGAPZαA/rhCRP经酶切及DNA测序鉴定构建成功.重组毕赤酵母工程菌株成功组成型表达23kDa的rhCRP,27h即达到最大表达水平,表达量约3mg/L.经一步分离纯化获得纯度为96.58％的rhCRP,经间接ELISA检测表明其具有免疫反应性.结论:成功构建了组成型分泌表达rhCRP的毕赤酵母菌株,为进一步自主研发人CRP检测试剂奠定了基础.
目的:構建組成型錶達重組人C-反應蛋白(Recombinant humanC-reactive protein,rhCRP)的畢赤酵母工程菌株,錶達、純化rhCRP併鑒定其免疫反應性.方法:將設計閤成的rhCRP基因剋隆到錶達載體pGAPZαA上併轉化至畢赤酵母X-33中進行組成型分泌錶達,通過His親和層析柱純化rhCRP.分彆採用SDS-PAGE、Western blot和間接ELISA法檢測目的蛋白併鑒定其免疫反應性.結果:重組錶達載體pGAPZαA/rhCRP經酶切及DNA測序鑒定構建成功.重組畢赤酵母工程菌株成功組成型錶達23kDa的rhCRP,27h即達到最大錶達水平,錶達量約3mg/L.經一步分離純化穫得純度為96.58％的rhCRP,經間接ELISA檢測錶明其具有免疫反應性.結論:成功構建瞭組成型分泌錶達rhCRP的畢赤酵母菌株,為進一步自主研髮人CRP檢測試劑奠定瞭基礎.
목적:구건조성형표체중조인C-반응단백(Recombinant humanC-reactive protein,rhCRP)적필적효모공정균주,표체、순화rhCRP병감정기면역반응성.방법:장설계합성적rhCRP기인극륭도표체재체pGAPZαA상병전화지필적효모X-33중진행조성형분비표체,통과His친화층석주순화rhCRP.분별채용SDS-PAGE、Western blot화간접ELISA법검측목적단백병감정기면역반응성.결과:중조표체재체pGAPZαA/rhCRP경매절급DNA측서감정구건성공.중조필적효모공정균주성공조성형표체23kDa적rhCRP,27h즉체도최대표체수평,표체량약3mg/L.경일보분리순화획득순도위96.58％적rhCRP,경간접ELISA검측표명기구유면역반응성.결론:성공구건료조성형분비표체rhCRP적필적효모균주,위진일보자주연발인CRP검측시제전정료기출.
