生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2013年
1期
68-72
,共5页
李志辉%曾琳姣%王慧煜%梅琳%刘永飞%韩雪清
李誌輝%曾琳姣%王慧煜%梅琳%劉永飛%韓雪清
리지휘%증림교%왕혜욱%매림%류영비%한설청
A型流感病毒%NS1蛋白%A549细胞系%稳定表达
A型流感病毒%NS1蛋白%A549細胞繫%穩定錶達
A형류감병독%NS1단백%A549세포계%은정표체
A型流感病毒的NSl(Nonstructurol 1 protein,NSl)蛋白是病毒复制、毒力等的重要调节蛋白.运用RT-PCR方法扩增A/Beijing/501/2009 (H1N1)流感病毒NS1基因,克隆至真核表达载体pCMV-HA,用Lipofectamine 2000将线性化pCMV-HA-NS1与neo基因共同转染A549细胞,通过G418筛选获得阳性重组细胞,并采用PCR、RT-PCR、Western blot技术检测重组细胞中NS1蛋白的表达,通过免疫荧光技术观察NS1蛋白在细胞中的定位.PCR、RT-PCR检测显示NS1基因成功整合进入细胞基因组,并转录为mRNA;Western blot检测显示重组细胞系稳定表达NS1蛋白,免疫荧光显示NS1蛋白定位于细胞核内.表明通过G418筛选,成功构建稳定表达NS1蛋白的重组A549-HA-NS1细胞系,且NS1蛋白定位于细胞核内,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定基础.
A型流感病毒的NSl(Nonstructurol 1 protein,NSl)蛋白是病毒複製、毒力等的重要調節蛋白.運用RT-PCR方法擴增A/Beijing/501/2009 (H1N1)流感病毒NS1基因,剋隆至真覈錶達載體pCMV-HA,用Lipofectamine 2000將線性化pCMV-HA-NS1與neo基因共同轉染A549細胞,通過G418篩選穫得暘性重組細胞,併採用PCR、RT-PCR、Western blot技術檢測重組細胞中NS1蛋白的錶達,通過免疫熒光技術觀察NS1蛋白在細胞中的定位.PCR、RT-PCR檢測顯示NS1基因成功整閤進入細胞基因組,併轉錄為mRNA;Western blot檢測顯示重組細胞繫穩定錶達NS1蛋白,免疫熒光顯示NS1蛋白定位于細胞覈內.錶明通過G418篩選,成功構建穩定錶達NS1蛋白的重組A549-HA-NS1細胞繫,且NS1蛋白定位于細胞覈內,為進一步研究NS1蛋白的生物學功能奠定基礎.
A형류감병독적NSl(Nonstructurol 1 protein,NSl)단백시병독복제、독력등적중요조절단백.운용RT-PCR방법확증A/Beijing/501/2009 (H1N1)류감병독NS1기인,극륭지진핵표체재체pCMV-HA,용Lipofectamine 2000장선성화pCMV-HA-NS1여neo기인공동전염A549세포,통과G418사선획득양성중조세포,병채용PCR、RT-PCR、Western blot기술검측중조세포중NS1단백적표체,통과면역형광기술관찰NS1단백재세포중적정위.PCR、RT-PCR검측현시NS1기인성공정합진입세포기인조,병전록위mRNA;Western blot검측현시중조세포계은정표체NS1단백,면역형광현시NS1단백정위우세포핵내.표명통과G418사선,성공구건은정표체NS1단백적중조A549-HA-NS1세포계,차NS1단백정위우세포핵내,위진일보연구NS1단백적생물학공능전정기출.
