生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2013年
1期
14-19,62
,共7页
张秀丽%陈格飞%林瑛%李佳%孟清
張秀麗%陳格飛%林瑛%李佳%孟清
장수려%진격비%림영%리가%맹청
4Rep%基因克隆%融合蛋白%原核表达
4Rep%基因剋隆%融閤蛋白%原覈錶達
4Rep%기인극륭%융합단백%원핵표체
参照GenBank收录的牵引丝蛋白编码序列,经过密码子优化,人工合成3段cDNA序列:NT、CT和4Rep,由Ⅰ型限制性内切酶Bsa Ⅰ和BspM Ⅰ介导无缝拼接,分别构建4RepCT、NT4RepCT、NT8RepCT和NT12RepCT重组模块.通过改造表达载体和优化培养温度,成功提高了4RepCT的表达量(30 mg/L).另外还首次成功表达NT4RepCT和NT8RepCT重组蛋白模块,表达量分别为21 mg/L和8.5 mg/L.4RepCT表达量的提高及NT4RepCT和NT8RepCT的成功表达证实了融合标签TRX有利于提高蛛丝蛋白的表达水平,为E.australis 全长牵引丝蛋白的表达奠定了基础.
參照GenBank收錄的牽引絲蛋白編碼序列,經過密碼子優化,人工閤成3段cDNA序列:NT、CT和4Rep,由Ⅰ型限製性內切酶Bsa Ⅰ和BspM Ⅰ介導無縫拼接,分彆構建4RepCT、NT4RepCT、NT8RepCT和NT12RepCT重組模塊.通過改造錶達載體和優化培養溫度,成功提高瞭4RepCT的錶達量(30 mg/L).另外還首次成功錶達NT4RepCT和NT8RepCT重組蛋白模塊,錶達量分彆為21 mg/L和8.5 mg/L.4RepCT錶達量的提高及NT4RepCT和NT8RepCT的成功錶達證實瞭融閤標籤TRX有利于提高蛛絲蛋白的錶達水平,為E.australis 全長牽引絲蛋白的錶達奠定瞭基礎.
삼조GenBank수록적견인사단백편마서렬,경과밀마자우화,인공합성3단cDNA서렬:NT、CT화4Rep,유Ⅰ형한제성내절매Bsa Ⅰ화BspM Ⅰ개도무봉병접,분별구건4RepCT、NT4RepCT、NT8RepCT화NT12RepCT중조모괴.통과개조표체재체화우화배양온도,성공제고료4RepCT적표체량(30 mg/L).령외환수차성공표체NT4RepCT화NT8RepCT중조단백모괴,표체량분별위21 mg/L화8.5 mg/L.4RepCT표체량적제고급NT4RepCT화NT8RepCT적성공표체증실료융합표첨TRX유리우제고주사단백적표체수평,위E.australis 전장견인사단백적표체전정료기출.
