华东师范大学学报（自然科学版）
華東師範大學學報（自然科學版）
화동사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF EAST CHINA NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2013年
6期
171-180
,共10页
潘李念%万文彬%张姝芳%诸葛慧%周品品%杨仙玉
潘李唸%萬文彬%張姝芳%諸葛慧%週品品%楊仙玉
반리념%만문빈%장주방%제갈혜%주품품%양선옥
中华大蟾蜍%半乳糖凝聚素3%分子多样性
中華大蟾蜍%半乳糖凝聚素3%分子多樣性
중화대섬서%반유당응취소3%분자다양성
Bufo gargarizans%galectin-3%molecular diversity
使用TAKARA的SMARTer TMRACE cDNA Amplification Kit和改进的Quantscript RT kit方法制备了3组源于同一中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)个体皮肤总核糖核酸(RNA)的第一链互补脱氧核糖核酸(cDNA),并以此为模板通过聚合酶链式反应(PCR,polymerase chain reaction)扩增半乳糖凝聚素3(gal-3)的全长开放阅读框(ORF,open reading frame),然后进行PCR产物的克隆、测序,再通过多种形式的序列比对分析该基因多样性产生的原因.从3组实验得到31个克隆,去除组内和组间重复出现的序列,共获得16个不同的cDNA.相同的序列,相同的单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism,SNP)以及相同位置相同数目的碱基缺失在3组独立的实验中重复出现,表明gal-3基因多样性.实际上,gal-3基因的多样性导致其编码蛋白的多样性.尽管如此,推导的氨基酸序列比对显示半乳糖凝聚素3糖基结合位点、磷酸化位点以及与其生物学功能关系密切的相关基序均高度保守,暗示中华大蟾蜍皮肤gal-3基因多样性的客观存在.
使用TAKARA的SMARTer TMRACE cDNA Amplification Kit和改進的Quantscript RT kit方法製備瞭3組源于同一中華大蟾蜍(Bufo gargarizans)箇體皮膚總覈糖覈痠(RNA)的第一鏈互補脫氧覈糖覈痠(cDNA),併以此為模闆通過聚閤酶鏈式反應(PCR,polymerase chain reaction)擴增半乳糖凝聚素3(gal-3)的全長開放閱讀框(ORF,open reading frame),然後進行PCR產物的剋隆、測序,再通過多種形式的序列比對分析該基因多樣性產生的原因.從3組實驗得到31箇剋隆,去除組內和組間重複齣現的序列,共穫得16箇不同的cDNA.相同的序列,相同的單覈苷痠多態性位點(single nucleotide polymorphism,SNP)以及相同位置相同數目的堿基缺失在3組獨立的實驗中重複齣現,錶明gal-3基因多樣性.實際上,gal-3基因的多樣性導緻其編碼蛋白的多樣性.儘管如此,推導的氨基痠序列比對顯示半乳糖凝聚素3糖基結閤位點、燐痠化位點以及與其生物學功能關繫密切的相關基序均高度保守,暗示中華大蟾蜍皮膚gal-3基因多樣性的客觀存在.
사용TAKARA적SMARTer TMRACE cDNA Amplification Kit화개진적Quantscript RT kit방법제비료3조원우동일중화대섬서(Bufo gargarizans)개체피부총핵당핵산(RNA)적제일련호보탈양핵당핵산(cDNA),병이차위모판통과취합매련식반응(PCR,polymerase chain reaction)확증반유당응취소3(gal-3)적전장개방열독광(ORF,open reading frame),연후진행PCR산물적극륭、측서,재통과다충형식적서렬비대분석해기인다양성산생적원인.종3조실험득도31개극륭,거제조내화조간중복출현적서렬,공획득16개불동적cDNA.상동적서렬,상동적단핵감산다태성위점(single nucleotide polymorphism,SNP)이급상동위치상동수목적감기결실재3조독립적실험중중복출현,표명gal-3기인다양성.실제상,gal-3기인적다양성도치기편마단백적다양성.진관여차,추도적안기산서렬비대현시반유당응취소3당기결합위점、린산화위점이급여기생물학공능관계밀절적상관기서균고도보수,암시중화대섬서피부gal-3기인다양성적객관존재.
