水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2013年
1期
16-21
,共6页
彭跃跃%丁燏%王金慧%简纪常%鲁义善%刘莹
彭躍躍%丁燏%王金慧%簡紀常%魯義善%劉瑩
팽약약%정율%왕금혜%간기상%로의선%류형
南极衣藻%谷胱甘肽-S-转移酶%表达%低温
南極衣藻%穀胱甘肽-S-轉移酶%錶達%低溫
남겁의조%곡광감태-S-전이매%표체%저온
谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferase,GST,EC2.5.1.18)是生物体内一种重要的抗氧化酶,为阐明GST在南极衣藻(Chlamydomonas sp.ICE-L)中的具体地位,采用实时荧光定量PCR对不同温度下南极衣藻的GST基因的表达进行了分析; 并构建了原核表达载体pET28a(+)-GST,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,通过平板培养法探讨了重组菌E.coli BL21(pET28a(+)-GST)对低温胁迫的耐受性.结果显示,GST在0℃时表达量最高,最高可达对照组的两倍多; pET28a(+)-GST重组表达载体在E.coli BL21中实现了高效表达,且主要以包涵体形式存在,经HisTrap HP柱分离纯化获得高纯度的GST融合蛋白,并通过SDS-PAGE及Western blot分析得以验证; 对低温胁迫实验发现南极衣藻GST蛋白的表达可以提高重组菌E.coli BL21对低温的耐受性,说明GST基因对南极衣藻适应南极低温环境具有重要作用.
穀胱甘肽-S-轉移酶(Glutathione-S-transferase,GST,EC2.5.1.18)是生物體內一種重要的抗氧化酶,為闡明GST在南極衣藻(Chlamydomonas sp.ICE-L)中的具體地位,採用實時熒光定量PCR對不同溫度下南極衣藻的GST基因的錶達進行瞭分析; 併構建瞭原覈錶達載體pET28a(+)-GST,轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中進行誘導錶達,通過平闆培養法探討瞭重組菌E.coli BL21(pET28a(+)-GST)對低溫脅迫的耐受性.結果顯示,GST在0℃時錶達量最高,最高可達對照組的兩倍多; pET28a(+)-GST重組錶達載體在E.coli BL21中實現瞭高效錶達,且主要以包涵體形式存在,經HisTrap HP柱分離純化穫得高純度的GST融閤蛋白,併通過SDS-PAGE及Western blot分析得以驗證; 對低溫脅迫實驗髮現南極衣藻GST蛋白的錶達可以提高重組菌E.coli BL21對低溫的耐受性,說明GST基因對南極衣藻適應南極低溫環境具有重要作用.
곡광감태-S-전이매(Glutathione-S-transferase,GST,EC2.5.1.18)시생물체내일충중요적항양화매,위천명GST재남겁의조(Chlamydomonas sp.ICE-L)중적구체지위,채용실시형광정량PCR대불동온도하남겁의조적GST기인적표체진행료분석; 병구건료원핵표체재체pET28a(+)-GST,전화지대장간균BL21(DE3)중진행유도표체,통과평판배양법탐토료중조균E.coli BL21(pET28a(+)-GST)대저온협박적내수성.결과현시,GST재0℃시표체량최고,최고가체대조조적량배다; pET28a(+)-GST중조표체재체재E.coli BL21중실현료고효표체,차주요이포함체형식존재,경HisTrap HP주분리순화획득고순도적GST융합단백,병통과SDS-PAGE급Western blot분석득이험증; 대저온협박실험발현남겁의조GST단백적표체가이제고중조균E.coli BL21대저온적내수성,설명GST기인대남겁의조괄응남겁저온배경구유중요작용.
