中华临床医师杂志（电子版）
中華臨床醫師雜誌（電子版）
중화림상의사잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CLINICIANS(ELECTRONIC VERSION)
2012年
20期
80-82
,共3页
孙兆刚%付鹏%刘爱华%王静波%孙新六%刘兴田
孫兆剛%付鵬%劉愛華%王靜波%孫新六%劉興田
손조강%부붕%류애화%왕정파%손신륙%류흥전
慢病毒属%绿色荧光蛋白质类%MEF2C%293T细胞
慢病毒屬%綠色熒光蛋白質類%MEF2C%293T細胞
만병독속%록색형광단백질류%MEF2C%293T세포
Lentivirus%Green fluorescent proteins%MEF2C%293T cell line
目的 构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)慢病毒表达载体并检测其表达性能,以便应用过表达技术进一步研究MEF2C的功能.方法 以人MEF2C基因序列为模板合成其编码框序列,通过限制性内切酶Not Ⅰ和Nsi Ⅰ酶切、T4 DNA连接酶连接,将MEF2C插入慢病毒载体质粒LV5-GFP,构建人MEF2C基因重组慢病毒质粒载体,转化感受态细菌,筛选阳性克隆,与包装质粒通过脂质体共转染人胚肾细胞系293T,进行慢病毒包装并测定病毒滴度.病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察感染效率,PCR方法检测MEF2C mRNA的过表达情况.结果 成功构建慢病毒表达载体LV5-MEF2C-GFP,三质粒共转染293T细胞后形成假慢病毒颗粒；浓缩假病毒后测定其滴度为2×109 TU/ml;以复感染系数MOI为5感染293T细胞,感染效率在70％以上.PCR证实感染带有目的基因假病毒的293T细胞表达MEF2C mRNA的水平较感染阴性对照病毒的293T细胞表达水平明显升高(=11.93,P=0.000).结论 成功构建MEF2C慢病毒表达系统,为应用过表达技术探索其在肿瘤发生和发展中的作用奠定了基础.
目的 構建人肌細胞增彊因子2C(MEF2C)慢病毒錶達載體併檢測其錶達性能,以便應用過錶達技術進一步研究MEF2C的功能.方法 以人MEF2C基因序列為模闆閤成其編碼框序列,通過限製性內切酶Not Ⅰ和Nsi Ⅰ酶切、T4 DNA連接酶連接,將MEF2C插入慢病毒載體質粒LV5-GFP,構建人MEF2C基因重組慢病毒質粒載體,轉化感受態細菌,篩選暘性剋隆,與包裝質粒通過脂質體共轉染人胚腎細胞繫293T,進行慢病毒包裝併測定病毒滴度.病毒感染293T細胞,熒光顯微鏡下觀察感染效率,PCR方法檢測MEF2C mRNA的過錶達情況.結果 成功構建慢病毒錶達載體LV5-MEF2C-GFP,三質粒共轉染293T細胞後形成假慢病毒顆粒；濃縮假病毒後測定其滴度為2×109 TU/ml;以複感染繫數MOI為5感染293T細胞,感染效率在70％以上.PCR證實感染帶有目的基因假病毒的293T細胞錶達MEF2C mRNA的水平較感染陰性對照病毒的293T細胞錶達水平明顯升高(=11.93,P=0.000).結論 成功構建MEF2C慢病毒錶達繫統,為應用過錶達技術探索其在腫瘤髮生和髮展中的作用奠定瞭基礎.
목적 구건인기세포증강인자2C(MEF2C)만병독표체재체병검측기표체성능,이편응용과표체기술진일보연구MEF2C적공능.방법 이인MEF2C기인서렬위모판합성기편마광서렬,통과한제성내절매Not Ⅰ화Nsi Ⅰ매절、T4 DNA련접매련접,장MEF2C삽입만병독재체질립LV5-GFP,구건인MEF2C기인중조만병독질립재체,전화감수태세균,사선양성극륭,여포장질립통과지질체공전염인배신세포계293T,진행만병독포장병측정병독적도.병독감염293T세포,형광현미경하관찰감염효솔,PCR방법검측MEF2C mRNA적과표체정황.결과 성공구건만병독표체재체LV5-MEF2C-GFP,삼질립공전염293T세포후형성가만병독과립；농축가병독후측정기적도위2×109 TU/ml;이복감염계수MOI위5감염293T세포,감염효솔재70％이상.PCR증실감염대유목적기인가병독적293T세포표체MEF2C mRNA적수평교감염음성대조병독적293T세포표체수평명현승고(=11.93,P=0.000).결론 성공구건MEF2C만병독표체계통,위응용과표체기술탐색기재종류발생화발전중적작용전정료기출.
