中国组织化学与细胞化学杂志
中國組織化學與細胞化學雜誌
중국조직화학여세포화학잡지
CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISY AND CYTOCHEMISY
2013年
2期
95-99
,共5页
李鹏程%王赟%左后娟%邹远林%刘正湘
李鵬程%王赟%左後娟%鄒遠林%劉正湘
리붕정%왕빈%좌후연%추원림%류정상
CD151%突变体%人脐静脉内皮细胞系%稳定表达
CD151%突變體%人臍靜脈內皮細胞繫%穩定錶達
CD151%돌변체%인제정맥내피세포계%은정표체
目的 建立能够稳定高表达四跨膜蛋白CD151及其突变体的人脐静脉内皮细胞系,为研究CD151在内皮细胞血管形成中的作用奠定基础.方法 成功构建重组质粒rAAV-CD151,rAAV-CD151-AAA突变体及rAAV-CD151-ARSA突变体,并用rAAV-GFP作对照,应用脂质体介导质粒转染的方法将重组质粒和对照质粒分别转染至人脐静脉内皮细胞中,通过G418进行筛选,建立稳定高表达CD151蛋白的内皮细胞系.Westernblot检测目的蛋白表达,对构建好的稳定转染细胞系进行筛选和鉴定.结果 rAAV-CD151,rAAV-CD151-AAA突变体,rAAV-CD151-ARSA突变体及rAAV-GFP重组质粒成功整合入人脐静脉内皮细胞,并能够稳定的表达相应的目的蛋白.结论 通过本实验能够获得稳定高表达野生型CD151及突变体CD151的内皮细胞系,为研究CD151在调节内皮细胞各种病理生理改变中的作用提供了坚实的实验基础.
目的 建立能夠穩定高錶達四跨膜蛋白CD151及其突變體的人臍靜脈內皮細胞繫,為研究CD151在內皮細胞血管形成中的作用奠定基礎.方法 成功構建重組質粒rAAV-CD151,rAAV-CD151-AAA突變體及rAAV-CD151-ARSA突變體,併用rAAV-GFP作對照,應用脂質體介導質粒轉染的方法將重組質粒和對照質粒分彆轉染至人臍靜脈內皮細胞中,通過G418進行篩選,建立穩定高錶達CD151蛋白的內皮細胞繫.Westernblot檢測目的蛋白錶達,對構建好的穩定轉染細胞繫進行篩選和鑒定.結果 rAAV-CD151,rAAV-CD151-AAA突變體,rAAV-CD151-ARSA突變體及rAAV-GFP重組質粒成功整閤入人臍靜脈內皮細胞,併能夠穩定的錶達相應的目的蛋白.結論 通過本實驗能夠穫得穩定高錶達野生型CD151及突變體CD151的內皮細胞繫,為研究CD151在調節內皮細胞各種病理生理改變中的作用提供瞭堅實的實驗基礎.
목적 건립능구은정고표체사과막단백CD151급기돌변체적인제정맥내피세포계,위연구CD151재내피세포혈관형성중적작용전정기출.방법 성공구건중조질립rAAV-CD151,rAAV-CD151-AAA돌변체급rAAV-CD151-ARSA돌변체,병용rAAV-GFP작대조,응용지질체개도질립전염적방법장중조질립화대조질립분별전염지인제정맥내피세포중,통과G418진행사선,건립은정고표체CD151단백적내피세포계.Westernblot검측목적단백표체,대구건호적은정전염세포계진행사선화감정.결과 rAAV-CD151,rAAV-CD151-AAA돌변체,rAAV-CD151-ARSA돌변체급rAAV-GFP중조질립성공정합입인제정맥내피세포,병능구은정적표체상응적목적단백.결론 통과본실험능구획득은정고표체야생형CD151급돌변체CD151적내피세포계,위연구CD151재조절내피세포각충병리생리개변중적작용제공료견실적실험기출.
