中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
4期
688-694
,共7页
于文燕%马小娟%孙宏卫%买买提祖农·买苏尔%马瑞斌%柯颖%刘玉新%马琪
于文燕%馬小娟%孫宏衛%買買提祖農·買囌爾%馬瑞斌%柯穎%劉玉新%馬琪
우문연%마소연%손굉위%매매제조농·매소이%마서빈%가영%류옥신%마기
HuR蛋白%NF-κB抑制因子α%转录后调控
HuR蛋白%NF-κB抑製因子α%轉錄後調控
HuR단백%NF-κB억제인자α%전록후조공
目的:探讨RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α(IκB-α)转录后调控机制.方法:构建IκB-αmRNA 3'UTR报告基因真核表达质粒,并转染3T3细胞；体外生物素标记IκB-α mRNA 3'UTR并进行RNA pull-down；过表达及干扰HuR后,qPCR检测其对IκB-αmRNA稳定性的影响,Western bltting检测其对IκB-α蛋白表达的影响.结果:(1) IκB-α mRNA 3'UTR报告基因真核表达质粒构建成功；(2)报告基因检测:共转染pcDNA3-HA-HuR质粒及IκB-α mRNA 3'UTR报告基因质粒后与对照组相比其数值明显增高；(3)用生物素标记的IκB-α mRNA3'UTR探针进行RNA pull-down,可以检测到特异性结合的HuR蛋白；(4)过表达HuR,IκB-α mRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显上调；干扰HuR表达后,IκB-α mRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显下调.结论:(1) HuR可以与IκB-α mRNA 3'UTR特异性结合并参与调节IκB-α mRNA 3'UTR的功能；(2) HuR对IκB-α mRNA稳定性无明显影响,其主要调控IκB-α蛋白表达,使其表达上调.
目的:探討RNA結閤蛋白HuR對NF-κB抑製因子α(IκB-α)轉錄後調控機製.方法:構建IκB-αmRNA 3'UTR報告基因真覈錶達質粒,併轉染3T3細胞；體外生物素標記IκB-α mRNA 3'UTR併進行RNA pull-down；過錶達及榦擾HuR後,qPCR檢測其對IκB-αmRNA穩定性的影響,Western bltting檢測其對IκB-α蛋白錶達的影響.結果:(1) IκB-α mRNA 3'UTR報告基因真覈錶達質粒構建成功；(2)報告基因檢測:共轉染pcDNA3-HA-HuR質粒及IκB-α mRNA 3'UTR報告基因質粒後與對照組相比其數值明顯增高；(3)用生物素標記的IκB-α mRNA3'UTR探針進行RNA pull-down,可以檢測到特異性結閤的HuR蛋白；(4)過錶達HuR,IκB-α mRNA穩定性無明顯變化,蛋白錶達明顯上調；榦擾HuR錶達後,IκB-α mRNA穩定性無明顯變化,蛋白錶達明顯下調.結論:(1) HuR可以與IκB-α mRNA 3'UTR特異性結閤併參與調節IκB-α mRNA 3'UTR的功能；(2) HuR對IκB-α mRNA穩定性無明顯影響,其主要調控IκB-α蛋白錶達,使其錶達上調.
목적:탐토RNA결합단백HuR대NF-κB억제인자α(IκB-α)전록후조공궤제.방법:구건IκB-αmRNA 3'UTR보고기인진핵표체질립,병전염3T3세포；체외생물소표기IκB-α mRNA 3'UTR병진행RNA pull-down；과표체급간우HuR후,qPCR검측기대IκB-αmRNA은정성적영향,Western bltting검측기대IκB-α단백표체적영향.결과:(1) IκB-α mRNA 3'UTR보고기인진핵표체질립구건성공；(2)보고기인검측:공전염pcDNA3-HA-HuR질립급IκB-α mRNA 3'UTR보고기인질립후여대조조상비기수치명현증고；(3)용생물소표기적IκB-α mRNA3'UTR탐침진행RNA pull-down,가이검측도특이성결합적HuR단백；(4)과표체HuR,IκB-α mRNA은정성무명현변화,단백표체명현상조；간우HuR표체후,IκB-α mRNA은정성무명현변화,단백표체명현하조.결론:(1) HuR가이여IκB-α mRNA 3'UTR특이성결합병삼여조절IκB-α mRNA 3'UTR적공능；(2) HuR대IκB-α mRNA은정성무명현영향,기주요조공IκB-α단백표체,사기표체상조.
