临床肝胆病杂志
臨床肝膽病雜誌
림상간담병잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL HEPATOLOGY
2014年
2期
136-140
,共5页
彭米林%肖新强%蒋永芳%田沂%许允%张旻%王文龙%彭锋%龚国忠
彭米林%肖新彊%蔣永芳%田沂%許允%張旻%王文龍%彭鋒%龔國忠
팽미림%초신강%장영방%전기%허윤%장민%왕문룡%팽봉%공국충
肝炎病毒属%HIV%病毒非结构蛋白质类%HIV长末端重复序列
肝炎病毒屬%HIV%病毒非結構蛋白質類%HIV長末耑重複序列
간염병독속%HIV%병독비결구단백질류%HIV장말단중복서렬
hepacivirus%HIV%viral nonstructural proteins%HIV long terminal repeat
目的 本研究拟探讨HCV非结构蛋白5A(NS5A)对HIV长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)影响,从而为HCV对HIV的影响提供实验依据.方法 将构建的LTR启动子驱动的荧光素酶(Luc)报告基因表达质粒(pGL3-LTR-Luc)和含HCVNS5A基因的表达质粒pCNS5A共转染肝癌细胞株(Huh7细胞),采用免疫细胞化学技术、Westem Blot及逆转录聚合酶链反应检测HCV NS5A蛋白及mRNA的表达;本实验分三组,将质粒pGL3-LTR-Luc(空白组)、质粒pRc/CMV+ pGL3-LTR-Luc(对照组)、质粒pCNS5A+ pGL3-LTR-Luc(实验组)分别转染Huh7细胞,48 h后收集细胞,采用Luc活性检测LTR的活性,以观察HCVNS5A对LTR的调控影响.所得荧光活性值以均数±标准差表示,采用Levene’s方差齐性检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较行LSD-t检验.结果 转染pcNS5A质粒的Huh7细胞质经RT-PCR及Westem Blot检测,HCV NS5A mRNA及蛋白在细胞中获得表达.方差分析结果提示LTR荧光活性在三组间有明显的差异(F=7.876,P=0.002),进一步比较各组间的差异,结果提示共转染质粒pcNS5A+pGL3-LTR-Luc组的Huh7细胞中Luc相对活性(22 476±4471)明显高于单转染pGL3-LTR-Luc组(15 887±3039,P=0.002)及共转染质粒pRc/CMV+ pGL3-LTR-Luc组(16 321±4162,P=0.008),差异有统计学意义.结论 表达HCV NS5A的质粒pCNS5A成功转染至Huh7细胞;HCV NS5A蛋白能激活HIV LTR,提示HCV NS5A可能为HCV促进HIV复制的分子机制之一.
目的 本研究擬探討HCV非結構蛋白5A(NS5A)對HIV長末耑重複序列(long terminal repeat,LTR)影響,從而為HCV對HIV的影響提供實驗依據.方法 將構建的LTR啟動子驅動的熒光素酶(Luc)報告基因錶達質粒(pGL3-LTR-Luc)和含HCVNS5A基因的錶達質粒pCNS5A共轉染肝癌細胞株(Huh7細胞),採用免疫細胞化學技術、Westem Blot及逆轉錄聚閤酶鏈反應檢測HCV NS5A蛋白及mRNA的錶達;本實驗分三組,將質粒pGL3-LTR-Luc(空白組)、質粒pRc/CMV+ pGL3-LTR-Luc(對照組)、質粒pCNS5A+ pGL3-LTR-Luc(實驗組)分彆轉染Huh7細胞,48 h後收集細胞,採用Luc活性檢測LTR的活性,以觀察HCVNS5A對LTR的調控影響.所得熒光活性值以均數±標準差錶示,採用Levene’s方差齊性檢驗,多組間比較採用單因素方差分析,兩兩比較行LSD-t檢驗.結果 轉染pcNS5A質粒的Huh7細胞質經RT-PCR及Westem Blot檢測,HCV NS5A mRNA及蛋白在細胞中穫得錶達.方差分析結果提示LTR熒光活性在三組間有明顯的差異(F=7.876,P=0.002),進一步比較各組間的差異,結果提示共轉染質粒pcNS5A+pGL3-LTR-Luc組的Huh7細胞中Luc相對活性(22 476±4471)明顯高于單轉染pGL3-LTR-Luc組(15 887±3039,P=0.002)及共轉染質粒pRc/CMV+ pGL3-LTR-Luc組(16 321±4162,P=0.008),差異有統計學意義.結論 錶達HCV NS5A的質粒pCNS5A成功轉染至Huh7細胞;HCV NS5A蛋白能激活HIV LTR,提示HCV NS5A可能為HCV促進HIV複製的分子機製之一.
목적 본연구의탐토HCV비결구단백5A(NS5A)대HIV장말단중복서렬(long terminal repeat,LTR)영향,종이위HCV대HIV적영향제공실험의거.방법 장구건적LTR계동자구동적형광소매(Luc)보고기인표체질립(pGL3-LTR-Luc)화함HCVNS5A기인적표체질립pCNS5A공전염간암세포주(Huh7세포),채용면역세포화학기술、Westem Blot급역전록취합매련반응검측HCV NS5A단백급mRNA적표체;본실험분삼조,장질립pGL3-LTR-Luc(공백조)、질립pRc/CMV+ pGL3-LTR-Luc(대조조)、질립pCNS5A+ pGL3-LTR-Luc(실험조)분별전염Huh7세포,48 h후수집세포,채용Luc활성검측LTR적활성,이관찰HCVNS5A대LTR적조공영향.소득형광활성치이균수±표준차표시,채용Levene’s방차제성검험,다조간비교채용단인소방차분석,량량비교행LSD-t검험.결과 전염pcNS5A질립적Huh7세포질경RT-PCR급Westem Blot검측,HCV NS5A mRNA급단백재세포중획득표체.방차분석결과제시LTR형광활성재삼조간유명현적차이(F=7.876,P=0.002),진일보비교각조간적차이,결과제시공전염질립pcNS5A+pGL3-LTR-Luc조적Huh7세포중Luc상대활성(22 476±4471)명현고우단전염pGL3-LTR-Luc조(15 887±3039,P=0.002)급공전염질립pRc/CMV+ pGL3-LTR-Luc조(16 321±4162,P=0.008),차이유통계학의의.결론 표체HCV NS5A적질립pCNS5A성공전염지Huh7세포;HCV NS5A단백능격활HIV LTR,제시HCV NS5A가능위HCV촉진HIV복제적분자궤제지일.
