CAJ | 학술논문

目的:探讨优化原核表达方法以及用亲和层析的方法制备重组人快型肌球蛋白结合蛋白C (MYBPC2).方法:根据MYBPC2的序列设计一对引物,在上下游引物的5’端分别加上BamHI和HindⅢ酶切位点.以健康人骨骼肌cDNA为模版,扩增第284位至第579位氨基酸残基对应的碱基序列,经双酶切后插入pMalc-5e载体中,测序鉴定重组质粒的序列,将构建好的重组质粒转化大肠杆菌中,IPTG诱导重组蛋白MYBPC2-MBP的表达,亲和层析纯化重组蛋白,蛋白电泳法鉴定蛋白的分子量及纯度,测定蛋白浓度并估算蛋白纯化后得率.用商品化的抗MYBPC2抗体证实所表达蛋白序列的正确性.以纯化的蛋白免疫动物获得动物免疫血清,用Western Blot的方法鉴定此蛋白的免疫原性.结果:人MYBPC2蛋白表达载体构建成功,每升大肠杆菌菌液可生产纯化后的重组MYBPC2蛋白约30mg,Western Blot显示重组蛋白与其抗体及抗血清特异结合.结论:本方法可以高效制备生产人MYBPC2蛋白片段,具备良好的抗原特异性和免疫原性.
목적:탐토우화원핵표체방법이급용친화층석적방법제비중조인쾌형기구단백결합단백C (MYBPC2).방법:근거MYBPC2적서렬설계일대인물,재상하유인물적5’단분별가상BamHI화HindⅢ매절위점.이건강인골격기cDNA위모판,확증제284위지제579위안기산잔기대응적감기서렬,경쌍매절후삽입pMalc-5e재체중,측서감정중조질립적서렬,장구건호적중조질립전화대장간균중,IPTG유도중조단백MYBPC2-MBP적표체,친화층석순화중조단백,단백전영법감정단백적분자량급순도,측정단백농도병고산단백순화후득솔.용상품화적항MYBPC2항체증실소표체단백서렬적정학성.이순화적단백면역동물획득동물면역혈청,용Western Blot적방법감정차단백적면역원성.결과:인MYBPC2단백표체재체구건성공,매승대장간균균액가생산순화후적중조MYBPC2단백약30mg,Western Blot현시중조단백여기항체급항혈청특이결합.결론:본방법가이고효제비생산인MYBPC2단백편단,구비량호적항원특이성화면역원성.