西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2013年
11期
2147-2152
,共6页
李娟%王泽文%杨利新%郑文寅%武立权%王荣富
李娟%王澤文%楊利新%鄭文寅%武立權%王榮富
리연%왕택문%양리신%정문인%무립권%왕영부
小麦%Fe超氧歧化酶基因%原核表达
小麥%Fe超氧歧化酶基因%原覈錶達
소맥%Fe초양기화매기인%원핵표체
Triticum aestivum%Fe superoxide dismutase (FeSOD) gene%prokaryotic expression
采用RT-PCR技术分离小麦Fe超氧歧化酶基因(FeSOD)的ORF全长cDNA,然后构建其原核表达载体,并对其表达的诱导时间、IPTG浓度、温度进行优化,以期获得较大量的重组蛋白.结果表明:实验获得了小麦FeSOD基因的ORF全长(600 bp),ORF全长与原核表达载体pET-Dutel相连接构建了原核表达载体pET-FeSOD,将pET-FeSOD导入宿主菌Rosetta(DE3)中,经SDS-PAGE电泳结果显示,可以高效表达融合蛋白且表达的蛋白均主要以包涵体的形式存在;重组质粒表达出25.8 kD的融合蛋白,除去载体pET-Duet1自身表达的3.0 kD蛋白后,与FeSOD编码的约为22.8 kD蛋白的大小一致;对诱导表达条件的优化结果显示,融合蛋白pET-FeSOD最佳的诱导表达条件为:0.5 mmol/L的IPTG浓度,37℃诱导5h.该研究结果为进一步深入研究该基因的特性与功能奠定了基础.
採用RT-PCR技術分離小麥Fe超氧歧化酶基因(FeSOD)的ORF全長cDNA,然後構建其原覈錶達載體,併對其錶達的誘導時間、IPTG濃度、溫度進行優化,以期穫得較大量的重組蛋白.結果錶明:實驗穫得瞭小麥FeSOD基因的ORF全長(600 bp),ORF全長與原覈錶達載體pET-Dutel相連接構建瞭原覈錶達載體pET-FeSOD,將pET-FeSOD導入宿主菌Rosetta(DE3)中,經SDS-PAGE電泳結果顯示,可以高效錶達融閤蛋白且錶達的蛋白均主要以包涵體的形式存在;重組質粒錶達齣25.8 kD的融閤蛋白,除去載體pET-Duet1自身錶達的3.0 kD蛋白後,與FeSOD編碼的約為22.8 kD蛋白的大小一緻;對誘導錶達條件的優化結果顯示,融閤蛋白pET-FeSOD最佳的誘導錶達條件為:0.5 mmol/L的IPTG濃度,37℃誘導5h.該研究結果為進一步深入研究該基因的特性與功能奠定瞭基礎.
채용RT-PCR기술분리소맥Fe초양기화매기인(FeSOD)적ORF전장cDNA,연후구건기원핵표체재체,병대기표체적유도시간、IPTG농도、온도진행우화,이기획득교대량적중조단백.결과표명:실험획득료소맥FeSOD기인적ORF전장(600 bp),ORF전장여원핵표체재체pET-Dutel상련접구건료원핵표체재체pET-FeSOD,장pET-FeSOD도입숙주균Rosetta(DE3)중,경SDS-PAGE전영결과현시,가이고효표체융합단백차표체적단백균주요이포함체적형식존재;중조질립표체출25.8 kD적융합단백,제거재체pET-Duet1자신표체적3.0 kD단백후,여FeSOD편마적약위22.8 kD단백적대소일치;대유도표체조건적우화결과현시,융합단백pET-FeSOD최가적유도표체조건위:0.5 mmol/L적IPTG농도,37℃유도5h.해연구결과위진일보심입연구해기인적특성여공능전정료기출.
