CAJ | 학술논문

目的:观察去乙酰化酶HDAC6特异性抑制剂Tubacin对MIN6细胞胰岛素分泌的影响,并探讨其可能机制.方法:用RT-PCR检测去乙酰化酶家族成员在MIN6细胞的表达,用免疫荧光技术观察HDAC6在小鼠胰岛和MIN6细胞内的定位;分别在5.6mmol/L和25mmol/L葡萄糖的DMEM中加和不加10μmol/L Tubacin,用其处理MIN6细胞24h,收集上清,ELISA检测胰岛素浓度.同时用MTT法检测Tubacin对MIN6细胞活力的影响,RT-PCR检测上述处理条件下Insulin基因的表达情况.以Western blot和免疫荧光技术检测Tubacin 对MIN6细胞骨架蛋白α-tubulin乙酰化水平的影响.结果:MIN6细胞中各乙酰化酶家族成员mRNA的表达水平相差较大,其中HDAC6表达相对较高.HDAC6主要表达于小鼠胰岛β细胞及MIN6细胞胞浆中.在5.6mmol/L和25mmol/L葡萄糖条件下,Tubacin处理24h可以显著抑制胰岛素分泌,但不影响MIN6细胞活力.同时,在5.6mmol/L葡萄糖存在条件下Tubacin不影响胰岛素基因表达,在25mmol/L葡萄糖存在条件下Tubacin可轻度上调胰岛素基因表达.Western blot和免疫荧光结果发现,Tubacin抑制胰岛素分泌的同时伴有α-tubulin乙酰化水平增加.结论:HDAC6抑制剂Tubacin可能通过增加MIN6细胞α-tubulin乙酰化水平,改变细胞骨架的活动度而抑制胰岛素分泌.
목적:관찰거을선화매HDAC6특이성억제제Tubacin대MIN6세포이도소분비적영향,병탐토기가능궤제.방법:용RT-PCR검측거을선화매가족성원재MIN6세포적표체,용면역형광기술관찰HDAC6재소서이도화MIN6세포내적정위;분별재5.6mmol/L화25mmol/L포도당적DMEM중가화불가10μmol/L Tubacin,용기처리MIN6세포24h,수집상청,ELISA검측이도소농도.동시용MTT법검측Tubacin대MIN6세포활력적영향,RT-PCR검측상술처리조건하Insulin기인적표체정황.이Western blot화면역형광기술검측Tubacin 대MIN6세포골가단백α-tubulin을선화수평적영향.결과:MIN6세포중각을선화매가족성원mRNA적표체수평상차교대,기중HDAC6표체상대교고.HDAC6주요표체우소서이도β세포급MIN6세포포장중.재5.6mmol/L화25mmol/L포도당조건하,Tubacin처리24h가이현저억제이도소분비,단불영향MIN6세포활력.동시,재5.6mmol/L포도당존재조건하Tubacin불영향이도소기인표체,재25mmol/L포도당존재조건하Tubacin가경도상조이도소기인표체.Western blot화면역형광결과발현,Tubacin억제이도소분비적동시반유α-tubulin을선화수평증가.결론:HDAC6억제제Tubacin가능통과증가MIN6세포α-tubulin을선화수평,개변세포골가적활동도이억제이도소분비.