放射免疫学杂志
放射免疫學雜誌
방사면역학잡지
JOURNAL OF RADIOMMUNOLOGY
2013年
6期
766-769
,共4页
胱抑素C%基因%克隆%原核表达
胱抑素C%基因%剋隆%原覈錶達
광억소C%기인%극륭%원핵표체
目的:研究人胱抑素C(Cycstatin C,Cys C)的原核重组表达及纯化.方法:通过RT-PCR扩增得到人Cys C的cDNA序列,并将其构建到pET-32a(+)的表达载体中.通过转化入BL21(DE3)表达宿主菌及表达条件的优化,摸索其最佳表达条件.通过镍柱纯化以及DEAE-sepharose FF离子交换层析的方法纯化得到重组的人Cys C蛋白.结果:通过RT-PCR扩增的方法得到的cDNA序列通过测序证明与预期一致.通过优化表达,Cys C的表达水平达到了160mg/L,约占总可溶蛋白的 20%,表达产物通过两步纯化后获得了纯度为95%的重组Cys C.结论:成功构建Cys C原核表达系统和蛋白纯化系统,为下一步制备多克隆抗体以及开发Cys C的免疫诊断试剂奠定了基础.
目的:研究人胱抑素C(Cycstatin C,Cys C)的原覈重組錶達及純化.方法:通過RT-PCR擴增得到人Cys C的cDNA序列,併將其構建到pET-32a(+)的錶達載體中.通過轉化入BL21(DE3)錶達宿主菌及錶達條件的優化,摸索其最佳錶達條件.通過鎳柱純化以及DEAE-sepharose FF離子交換層析的方法純化得到重組的人Cys C蛋白.結果:通過RT-PCR擴增的方法得到的cDNA序列通過測序證明與預期一緻.通過優化錶達,Cys C的錶達水平達到瞭160mg/L,約佔總可溶蛋白的 20%,錶達產物通過兩步純化後穫得瞭純度為95%的重組Cys C.結論:成功構建Cys C原覈錶達繫統和蛋白純化繫統,為下一步製備多剋隆抗體以及開髮Cys C的免疫診斷試劑奠定瞭基礎.
목적:연구인광억소C(Cycstatin C,Cys C)적원핵중조표체급순화.방법:통과RT-PCR확증득도인Cys C적cDNA서렬,병장기구건도pET-32a(+)적표체재체중.통과전화입BL21(DE3)표체숙주균급표체조건적우화,모색기최가표체조건.통과얼주순화이급DEAE-sepharose FF리자교환층석적방법순화득도중조적인Cys C단백.결과:통과RT-PCR확증적방법득도적cDNA서렬통과측서증명여예기일치.통과우화표체,Cys C적표체수평체도료160mg/L,약점총가용단백적 20%,표체산물통과량보순화후획득료순도위95%적중조Cys C.결론:성공구건Cys C원핵표체계통화단백순화계통,위하일보제비다극륭항체이급개발Cys C적면역진단시제전정료기출.
