中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
11期
2024-2029
,共6页
梁庆%李自成%邝素华%黄伟青%黄敏坚%林俊敏%梁子敬
樑慶%李自成%鄺素華%黃偉青%黃敏堅%林俊敏%樑子敬
량경%리자성%광소화%황위청%황민견%림준민%량자경
乳鼠心肌细胞%美托洛尔%去甲肾上腺素%缝隙连接蛋白43
乳鼠心肌細胞%美託洛爾%去甲腎上腺素%縫隙連接蛋白43
유서심기세포%미탁락이%거갑신상선소%봉극련접단백43
目的:研究美托洛尔(Meto)对去甲肾上腺素(NE)刺激下乳鼠心肌细胞凋亡及缝隙连接蛋白43(Cx43)磷酸化水平的影响.方法:新生SD乳鼠心肌细胞分为5组:(1)对照组(Con组,n=6);(2) NE组(n=6):在细胞中加入0.1 μmol/L NE孵育24 h;(3) NE+Meto组(n=6):细胞中同时加入0.1 μmol/L NE和0.1 μmol/L Meto孵育24 h;(4)NE+Meto+ PD98059组(n=6):细胞中提前30 min加入ERK磷酸化抑制剂10 μmol/L PD98059,后同时加入0.1 μmol/L NE和0.1 μmol/L Meto孵育24 h;(5)NE+PD98059组(n=6):细胞中提前30 min加入10 μmol/L PD98059,后加入0.1 μmol/L NE孵育24 h.24 h后计算各组心肌细胞搏动频率,MTT法检测细胞活性,RT-PCR检测各组心肌细胞Cx43 mRNA表达,采用 Western bloting法检测各组心肌细胞p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3蛋白表达.结果:(1)NE单独处理可显著增高心肌细胞搏动频率和降低心肌细胞活性,Meto阻断则可显著降低心肌细胞搏动频率和显著提高细胞活性;而PD98059单独处理则对心肌细胞搏动频率无明显影响,但PD98059处理后可在一定程度上抑制Meto提高细胞活性的作用.(2)与Con组比较,NE单独处理可显著上调心肌细胞Cx43 mRNA表达(P<0.01);而与NE组比较,Meto(P<0.01)或PD98059(P<0.01)的单独干预均可显著抑制Cx43 mRNA的表达,且Meto和PD98059两者共处理心肌细胞可进一步抑制NE上调Cx43 mRNA表达的作用(P<0.01).(3)与NE组比较,Meto可显著抑制NE诱导的心肌细胞p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3表达增加(P<0.01),PD98059和Meto两者共处理后可进一步增强Meto对p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3表达的抑制(P<0.01);而PD98059单独处理对NE诱导的心肌细胞p-Cx43和活化caspase-3表达增加则无显著影响(P>0.05).结论:美托洛尔对NE诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用与其独特的Cx43磷酸化抑制作用有关,该作用可能部分经由ERK1/2通路介导.
目的:研究美託洛爾(Meto)對去甲腎上腺素(NE)刺激下乳鼠心肌細胞凋亡及縫隙連接蛋白43(Cx43)燐痠化水平的影響.方法:新生SD乳鼠心肌細胞分為5組:(1)對照組(Con組,n=6);(2) NE組(n=6):在細胞中加入0.1 μmol/L NE孵育24 h;(3) NE+Meto組(n=6):細胞中同時加入0.1 μmol/L NE和0.1 μmol/L Meto孵育24 h;(4)NE+Meto+ PD98059組(n=6):細胞中提前30 min加入ERK燐痠化抑製劑10 μmol/L PD98059,後同時加入0.1 μmol/L NE和0.1 μmol/L Meto孵育24 h;(5)NE+PD98059組(n=6):細胞中提前30 min加入10 μmol/L PD98059,後加入0.1 μmol/L NE孵育24 h.24 h後計算各組心肌細胞搏動頻率,MTT法檢測細胞活性,RT-PCR檢測各組心肌細胞Cx43 mRNA錶達,採用 Western bloting法檢測各組心肌細胞p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3蛋白錶達.結果:(1)NE單獨處理可顯著增高心肌細胞搏動頻率和降低心肌細胞活性,Meto阻斷則可顯著降低心肌細胞搏動頻率和顯著提高細胞活性;而PD98059單獨處理則對心肌細胞搏動頻率無明顯影響,但PD98059處理後可在一定程度上抑製Meto提高細胞活性的作用.(2)與Con組比較,NE單獨處理可顯著上調心肌細胞Cx43 mRNA錶達(P<0.01);而與NE組比較,Meto(P<0.01)或PD98059(P<0.01)的單獨榦預均可顯著抑製Cx43 mRNA的錶達,且Meto和PD98059兩者共處理心肌細胞可進一步抑製NE上調Cx43 mRNA錶達的作用(P<0.01).(3)與NE組比較,Meto可顯著抑製NE誘導的心肌細胞p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3錶達增加(P<0.01),PD98059和Meto兩者共處理後可進一步增彊Meto對p-Cx43、p-ERK1/2和活化caspase-3錶達的抑製(P<0.01);而PD98059單獨處理對NE誘導的心肌細胞p-Cx43和活化caspase-3錶達增加則無顯著影響(P>0.05).結論:美託洛爾對NE誘導的心肌細胞凋亡的抑製作用與其獨特的Cx43燐痠化抑製作用有關,該作用可能部分經由ERK1/2通路介導.
목적:연구미탁락이(Meto)대거갑신상선소(NE)자격하유서심기세포조망급봉극련접단백43(Cx43)린산화수평적영향.방법:신생SD유서심기세포분위5조:(1)대조조(Con조,n=6);(2) NE조(n=6):재세포중가입0.1 μmol/L NE부육24 h;(3) NE+Meto조(n=6):세포중동시가입0.1 μmol/L NE화0.1 μmol/L Meto부육24 h;(4)NE+Meto+ PD98059조(n=6):세포중제전30 min가입ERK린산화억제제10 μmol/L PD98059,후동시가입0.1 μmol/L NE화0.1 μmol/L Meto부육24 h;(5)NE+PD98059조(n=6):세포중제전30 min가입10 μmol/L PD98059,후가입0.1 μmol/L NE부육24 h.24 h후계산각조심기세포박동빈솔,MTT법검측세포활성,RT-PCR검측각조심기세포Cx43 mRNA표체,채용 Western bloting법검측각조심기세포p-Cx43、p-ERK1/2화활화caspase-3단백표체.결과:(1)NE단독처리가현저증고심기세포박동빈솔화강저심기세포활성,Meto조단칙가현저강저심기세포박동빈솔화현저제고세포활성;이PD98059단독처리칙대심기세포박동빈솔무명현영향,단PD98059처리후가재일정정도상억제Meto제고세포활성적작용.(2)여Con조비교,NE단독처리가현저상조심기세포Cx43 mRNA표체(P<0.01);이여NE조비교,Meto(P<0.01)혹PD98059(P<0.01)적단독간예균가현저억제Cx43 mRNA적표체,차Meto화PD98059량자공처리심기세포가진일보억제NE상조Cx43 mRNA표체적작용(P<0.01).(3)여NE조비교,Meto가현저억제NE유도적심기세포p-Cx43、p-ERK1/2화활화caspase-3표체증가(P<0.01),PD98059화Meto량자공처리후가진일보증강Meto대p-Cx43、p-ERK1/2화활화caspase-3표체적억제(P<0.01);이PD98059단독처리대NE유도적심기세포p-Cx43화활화caspase-3표체증가칙무현저영향(P>0.05).결론:미탁락이대NE유도적심기세포조망적억제작용여기독특적Cx43린산화억제작용유관,해작용가능부분경유ERK1/2통로개도.
