CAJ | 학술논문

目的:构建稳定表达外源c-myc基因的人单核细胞白血病细胞株U937,并初步分析其特性.方法:首先构建重组质粒MSCV-c-myc-IRES-GFP (MMIG)载体,分别用MMIG及空载体MSCV-IRES-GFP(MIG)包装病毒,并感染U937细胞,用流式细胞术分选绿色荧光细胞,获得 U937/GFP和U937/MYC细胞,用荧光显微镜及流式细胞术检测GFP阳性率,用Western blotting测定细胞中c-Myc、survivin、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和Bcl-2的蛋白表达水平,流式细胞术检测U937/GFP和U937/MYC细胞周期,并用MTT法测定U937/GFP和U937/MYC细胞的生长情况,克隆形成实验检测克隆形成能力.结果:荧光显微镜观察,MIG和MMIG病毒感染后,2种细胞均表达绿色荧光蛋白;流式细胞术结果显示,MIG病毒感染的细胞荧光率为26.0%,MMIG病毒感染的细胞荧光率为27.7%;Western blotting的结果显示,c-Myc蛋白在MMIG病毒感染的细胞中表达水平升高.流式细胞术分选后,荧光显微镜观察可见绿色荧光蛋白表达明显增多,U937/GFP和U937/MYC细胞绿色荧光蛋白表达率分别达98.7%和93.7%.U937/MYC细胞中c-Myc蛋白表达较U937/GFP细胞显著升高,c-Myc蛋白下游的survivin表达增多,而凋亡相关蛋白XIAP及Bcl-2的表达则没有明显变化.细胞周期检测显示,U937/MYC细胞处于S期的细胞数增多.MTT实验结果显示,U937/MYC细胞的生长速率较U937/GFP细胞增快.U937/MYC细胞的克隆形成能力较U937/GFP细胞强.结论:成功构建了c-myc基因高表达的U937稳定细胞株U937/MYC.在U937/MYC细胞中,c-Myc及其下游的survivin表达明显上调,处于细胞周期S期的细胞数增多、细胞生长加快、克隆形成能力增强,提示c-Myc可能通过增强自我更新能力、加快细胞周期、促进相关抗凋亡蛋白表达从而提高细胞的存活率.
목적:구건은정표체외원c-myc기인적인단핵세포백혈병세포주U937,병초보분석기특성.방법:수선구건중조질립MSCV-c-myc-IRES-GFP (MMIG)재체,분별용MMIG급공재체MSCV-IRES-GFP(MIG)포장병독,병감염U937세포,용류식세포술분선록색형광세포,획득 U937/GFP화U937/MYC세포,용형광현미경급류식세포술검측GFP양성솔,용Western blotting측정세포중c-Myc、survivin、X련쇄조망억제단백(XIAP)화Bcl-2적단백표체수평,류식세포술검측U937/GFP화U937/MYC세포주기,병용MTT법측정U937/GFP화U937/MYC세포적생장정황,극륭형성실험검측극륭형성능력.결과:형광현미경관찰,MIG화MMIG병독감염후,2충세포균표체록색형광단백;류식세포술결과현시,MIG병독감염적세포형광솔위26.0%,MMIG병독감염적세포형광솔위27.7%;Western blotting적결과현시,c-Myc단백재MMIG병독감염적세포중표체수평승고.류식세포술분선후,형광현미경관찰가견록색형광단백표체명현증다,U937/GFP화U937/MYC세포록색형광단백표체솔분별체98.7%화93.7%.U937/MYC세포중c-Myc단백표체교U937/GFP세포현저승고,c-Myc단백하유적survivin표체증다,이조망상관단백XIAP급Bcl-2적표체칙몰유명현변화.세포주기검측현시,U937/MYC세포처우S기적세포수증다.MTT실험결과현시,U937/MYC세포적생장속솔교U937/GFP세포증쾌.U937/MYC세포적극륭형성능력교U937/GFP세포강.결론:성공구건료c-myc기인고표체적U937은정세포주U937/MYC.재U937/MYC세포중,c-Myc급기하유적survivin표체명현상조,처우세포주기S기적세포수증다、세포생장가쾌、극륭형성능력증강,제시c-Myc가능통과증강자아경신능력、가쾌세포주기、촉진상관항조망단백표체종이제고세포적존활솔.