医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2013年
11期
1125-1128
,共4页
FHL2%KCNA5%钾通道%免疫共沉淀%免疫荧光细胞化学
FHL2%KCNA5%鉀通道%免疫共沉澱%免疫熒光細胞化學
FHL2%KCNA5%갑통도%면역공침정%면역형광세포화학
目的 目前认为KCNA5通道蛋白是治疗房颤的一个理想靶点,文中旨在验证FHL2蛋白与KCNA5基因编码的心脏Kv1.5钾通道是否存在相互作用.方法 ①质粒构建:应用PCR法构建质粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2;②基因转染:应用Lipofectamine 2000将pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5质粒和pcDNA3.0-FHL2质粒共转染HEK293细胞;③免疫共沉淀:应用抗FHL2抗体和Protein A/G Plus-Agarose沉淀目的 蛋白,应用抗Myc抗体进行Western blot分析;④免疫荧光细胞化学分析:应用抗FHL2一抗和标记有FITC的二抗检测FHL2蛋白,应用抗Myc一抗和标记有Cy3的二抗检测KCNA5-Myc融合蛋白.结果 ①酶切和测序结果表明质粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2构建正确;②抗FHL2抗体能够将KCNA5从总蛋白中沉淀下来;③KCNA5蛋白和FHL2蛋白共定位于细胞膜上.结论 初步证实FHL2蛋白与KCNA5蛋白存在相互作用.
目的 目前認為KCNA5通道蛋白是治療房顫的一箇理想靶點,文中旨在驗證FHL2蛋白與KCNA5基因編碼的心髒Kv1.5鉀通道是否存在相互作用.方法 ①質粒構建:應用PCR法構建質粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2;②基因轉染:應用Lipofectamine 2000將pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5質粒和pcDNA3.0-FHL2質粒共轉染HEK293細胞;③免疫共沉澱:應用抗FHL2抗體和Protein A/G Plus-Agarose沉澱目的 蛋白,應用抗Myc抗體進行Western blot分析;④免疫熒光細胞化學分析:應用抗FHL2一抗和標記有FITC的二抗檢測FHL2蛋白,應用抗Myc一抗和標記有Cy3的二抗檢測KCNA5-Myc融閤蛋白.結果 ①酶切和測序結果錶明質粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2構建正確;②抗FHL2抗體能夠將KCNA5從總蛋白中沉澱下來;③KCNA5蛋白和FHL2蛋白共定位于細胞膜上.結論 初步證實FHL2蛋白與KCNA5蛋白存在相互作用.
목적 목전인위KCNA5통도단백시치료방전적일개이상파점,문중지재험증FHL2단백여KCNA5기인편마적심장Kv1.5갑통도시부존재상호작용.방법 ①질립구건:응용PCR법구건질립pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5화pcDNA3.0-FHL2;②기인전염:응용Lipofectamine 2000장pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5질립화pcDNA3.0-FHL2질립공전염HEK293세포;③면역공침정:응용항FHL2항체화Protein A/G Plus-Agarose침정목적 단백,응용항Myc항체진행Western blot분석;④면역형광세포화학분석:응용항FHL2일항화표기유FITC적이항검측FHL2단백,응용항Myc일항화표기유Cy3적이항검측KCNA5-Myc융합단백.결과 ①매절화측서결과표명질립pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5화pcDNA3.0-FHL2구건정학;②항FHL2항체능구장KCNA5종총단백중침정하래;③KCNA5단백화FHL2단백공정위우세포막상.결론 초보증실FHL2단백여KCNA5단백존재상호작용.
