激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2013年
5期
441-446，440
,共7页
张宁洁%张丽娜%李伟%林琳%高劲松%程文%余平
張寧潔%張麗娜%李偉%林琳%高勁鬆%程文%餘平
장저길%장려나%리위%림림%고경송%정문%여평
IL-1α%Hela229细胞%shRNA
IL-1α%Hela229細胞%shRNA
IL-1α%Hela229세포%shRNA
IL-1α%Hela229 cell%shRNA
目的:构建针对IL-1α基因的shRNA表达载体,筛选能够抑制Hela229细胞内源性IL-1α表达的shRNA,建立无内源性IL-1d表达的Hela229稳定细胞系.方法:根据shRNA的设计原则,以IL-1 αcDNA oligo为模板设计一段21 bp核苷酸目标序列,构建成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制IL-1α基因的重组shRNA质粒,转染Hela229细胞,经G418筛选后获得单克隆稳定细胞株,用ELISA方法在蛋白水平上检测IL-1α基因的沉默效果.结果:经酶切鉴定和测序分析确定IL-1 α-shRNA重组质粒构建正确,ELISA筛选出能够显著抑制内源性IL-1α表达的shRNA,获得沉默内源性IL-1 α表达的单克隆稳定的Hela229细胞株.结论:靶向IL-1α基因的重组shRNA表达质粒可显著抑制Hela229细胞内源性IL-1α的表达,成功构建靶向IL-1α基因沉默的Hela229稳定细胞系.
目的:構建針對IL-1α基因的shRNA錶達載體,篩選能夠抑製Hela229細胞內源性IL-1α錶達的shRNA,建立無內源性IL-1d錶達的Hela229穩定細胞繫.方法:根據shRNA的設計原則,以IL-1 αcDNA oligo為模闆設計一段21 bp覈苷痠目標序列,構建成siRNA的DNA模闆併剋隆到shRNA錶達載體pRNAT-U6.1/Neo中,穫得靶嚮抑製IL-1α基因的重組shRNA質粒,轉染Hela229細胞,經G418篩選後穫得單剋隆穩定細胞株,用ELISA方法在蛋白水平上檢測IL-1α基因的沉默效果.結果:經酶切鑒定和測序分析確定IL-1 α-shRNA重組質粒構建正確,ELISA篩選齣能夠顯著抑製內源性IL-1α錶達的shRNA,穫得沉默內源性IL-1 α錶達的單剋隆穩定的Hela229細胞株.結論:靶嚮IL-1α基因的重組shRNA錶達質粒可顯著抑製Hela229細胞內源性IL-1α的錶達,成功構建靶嚮IL-1α基因沉默的Hela229穩定細胞繫.
목적:구건침대IL-1α기인적shRNA표체재체,사선능구억제Hela229세포내원성IL-1α표체적shRNA,건립무내원성IL-1d표체적Hela229은정세포계.방법:근거shRNA적설계원칙,이IL-1 αcDNA oligo위모판설계일단21 bp핵감산목표서렬,구건성siRNA적DNA모판병극륭도shRNA표체재체pRNAT-U6.1/Neo중,획득파향억제IL-1α기인적중조shRNA질립,전염Hela229세포,경G418사선후획득단극륭은정세포주,용ELISA방법재단백수평상검측IL-1α기인적침묵효과.결과:경매절감정화측서분석학정IL-1 α-shRNA중조질립구건정학,ELISA사선출능구현저억제내원성IL-1α표체적shRNA,획득침묵내원성IL-1 α표체적단극륭은정적Hela229세포주.결론:파향IL-1α기인적중조shRNA표체질립가현저억제Hela229세포내원성IL-1α적표체,성공구건파향IL-1α기인침묵적Hela229은정세포계.
