石河子大学学报（自然科学版）
石河子大學學報（自然科學版）
석하자대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHIHEZI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2013年
4期
449-456
,共8页
周方永%李岩%薄新文%马勋
週方永%李巖%薄新文%馬勛
주방영%리암%박신문%마훈
分枝杆菌%多重PCR%假阳性%正交设计
分枝桿菌%多重PCR%假暘性%正交設計
분지간균%다중PCR%가양성%정교설계
Mycobacterium%multiplex PCR%false positive%orthogonal design
为了建立一种快速区分鉴定结核与非结核分枝杆菌的多重PCR方法,以分支杆菌属特异基因32 kD,结核分枝杆菌种特异基因MTP40和结核分枝杆菌复合群特异基因IS6110为目标基因,设计合成3对特异性引物,以结核分枝杆菌标准株DNA为模板,通过对PCR反应体系中DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶浓度5个因素的正交设计,以及PCR反应条件中各反应参数的优化,建立了鉴别分支杆菌的多重PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行了验证.结果显示:该方法对结核分枝杆菌标准株H37Ra能扩增出506、396和984 bp,对卡介苗(BCG)能扩增出506和984 bp片段,对禽分支杆菌、胞内分支杆菌、偶发分支杆菌、耻垢分支杆菌、龟分支杆菌能够扩增出506 bp片段,对大肠杆菌等的扩增结果均为阴性.建立的多重PCR敏感度最低可检出6.6×10-6 ng.结论:该方法具有特异性高、敏感性好等特点,可用于奶牛结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的鉴别诊断.
為瞭建立一種快速區分鑒定結覈與非結覈分枝桿菌的多重PCR方法,以分支桿菌屬特異基因32 kD,結覈分枝桿菌種特異基因MTP40和結覈分枝桿菌複閤群特異基因IS6110為目標基因,設計閤成3對特異性引物,以結覈分枝桿菌標準株DNA為模闆,通過對PCR反應體繫中DNA模闆濃度、Mg2+濃度、dNTPs濃度、引物濃度和TaqDNA聚閤酶濃度5箇因素的正交設計,以及PCR反應條件中各反應參數的優化,建立瞭鑒彆分支桿菌的多重PCR檢測方法,併對該方法的特異性、敏感性進行瞭驗證.結果顯示:該方法對結覈分枝桿菌標準株H37Ra能擴增齣506、396和984 bp,對卡介苗(BCG)能擴增齣506和984 bp片段,對禽分支桿菌、胞內分支桿菌、偶髮分支桿菌、恥垢分支桿菌、龜分支桿菌能夠擴增齣506 bp片段,對大腸桿菌等的擴增結果均為陰性.建立的多重PCR敏感度最低可檢齣6.6×10-6 ng.結論:該方法具有特異性高、敏感性好等特點,可用于奶牛結覈分枝桿菌和非結覈分枝桿菌的鑒彆診斷.
위료건립일충쾌속구분감정결핵여비결핵분지간균적다중PCR방법,이분지간균속특이기인32 kD,결핵분지간균충특이기인MTP40화결핵분지간균복합군특이기인IS6110위목표기인,설계합성3대특이성인물,이결핵분지간균표준주DNA위모판,통과대PCR반응체계중DNA모판농도、Mg2+농도、dNTPs농도、인물농도화TaqDNA취합매농도5개인소적정교설계,이급PCR반응조건중각반응삼수적우화,건립료감별분지간균적다중PCR검측방법,병대해방법적특이성、민감성진행료험증.결과현시:해방법대결핵분지간균표준주H37Ra능확증출506、396화984 bp,대잡개묘(BCG)능확증출506화984 bp편단,대금분지간균、포내분지간균、우발분지간균、치구분지간균、구분지간균능구확증출506 bp편단,대대장간균등적확증결과균위음성.건립적다중PCR민감도최저가검출6.6×10-6 ng.결론:해방법구유특이성고、민감성호등특점,가용우내우결핵분지간균화비결핵분지간균적감별진단.
