CAJ | 학술논문

创制基于Gateway重组技术的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,同时创制低成本低克隆背景的Gateway入门载体.利用入门载体,采用Gateway技术快速将目标基因重组到BiFC目标载体,并采用农杆菌注射侵染烟草的方法观察荧光互作结果.构建的Gateway入门载体,由于带有ccdB基因,非线性化的载体无法在ccdB敏感菌株中生长,因此消除了载体本身的背景.同时由Xcm Ⅰ酶切后产生的T突出,可以很好地与PCR产物结合,连接效率和普通商业化T载体一致.此外,由于载体可由实验室自行制备且采用了TA克隆,创制入门克隆的成本大大降低.借助该研究改造的BiFC目标载体,目的基因能快速地重组到目的载体用于基因互作鉴定.利用本研究构建的Gateway系统,能够以较低成本快速的进行基因克隆和互作研究.
창제기우Gateway중조기술적쌍분자형광호보(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)재체,동시창제저성본저극륭배경적Gateway입문재체.이용입문재체,채용Gateway기술쾌속장목표기인중조도BiFC목표재체,병채용농간균주사침염연초적방법관찰형광호작결과.구건적Gateway입문재체,유우대유ccdB기인,비선성화적재체무법재ccdB민감균주중생장,인차소제료재체본신적배경.동시유Xcm Ⅰ매절후산생적T돌출,가이흔호지여PCR산물결합,련접효솔화보통상업화T재체일치.차외,유우재체가유실험실자행제비차채용료TA극륭,창제입문극륭적성본대대강저.차조해연구개조적BiFC목표재체,목적기인능쾌속지중조도목적재체용우기인호작감정.이용본연구구건적Gateway계통,능구이교저성본쾌속적진행기인극륭화호작연구.