四川大学学报（自然科学版）
四川大學學報（自然科學版）
사천대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE EDITION）
2013年
5期
1119-1123
,共5页
徐漪沙%樊佳%晏华立%徐莺%陈放
徐漪沙%樊佳%晏華立%徐鶯%陳放
서의사%번가%안화립%서앵%진방
麻疯树%小热激蛋白%异源表达%亲和纯化%热激聚合反应
痳瘋樹%小熱激蛋白%異源錶達%親和純化%熱激聚閤反應
마풍수%소열격단백%이원표체%친화순화%열격취합반응
Jatropha curcas L.%small heat shock protein%heterologous expression%affinity purification%heat shock agglutination
将实验室已有的pET32a-JcHSP17.5重组载体,经测序验证后,转入大肠杆菌BL21(DE3) plysS中,不同温度条件下,用不同浓度异丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,优化表达条件;选择镍离子亲和层析柱(Ni-NTA)纯化JcHSP-17.5蛋白,SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度;通过热激聚合反应来鉴定蛋白的分子伴侣活性.结果表明,17℃,200 r/min,0.5 mM IPTG诱导13h为JcHSP-17.5蛋白的最佳诱导表达条件,使用200 mmol/L咪唑缓冲液纯化蛋白后,每500 mL菌液可得到1.345 mg的电泳纯蛋白,该蛋白在高温(45℃)条件下能够阻止苹果酸脱氢酶(MDH)发生聚合反应,表现出较强的分子伴侣活性.
將實驗室已有的pET32a-JcHSP17.5重組載體,經測序驗證後,轉入大腸桿菌BL21(DE3) plysS中,不同溫度條件下,用不同濃度異丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)誘導重組蛋白錶達,優化錶達條件;選擇鎳離子親和層析柱(Ni-NTA)純化JcHSP-17.5蛋白,SDS-PAGE電泳檢測蛋白純度;通過熱激聚閤反應來鑒定蛋白的分子伴侶活性.結果錶明,17℃,200 r/min,0.5 mM IPTG誘導13h為JcHSP-17.5蛋白的最佳誘導錶達條件,使用200 mmol/L咪唑緩遲液純化蛋白後,每500 mL菌液可得到1.345 mg的電泳純蛋白,該蛋白在高溫(45℃)條件下能夠阻止蘋果痠脫氫酶(MDH)髮生聚閤反應,錶現齣較彊的分子伴侶活性.
장실험실이유적pET32a-JcHSP17.5중조재체,경측서험증후,전입대장간균BL21(DE3) plysS중,불동온도조건하,용불동농도이병기류대-D-반유당감(IPTG)유도중조단백표체,우화표체조건;선택얼리자친화층석주(Ni-NTA)순화JcHSP-17.5단백,SDS-PAGE전영검측단백순도;통과열격취합반응래감정단백적분자반려활성.결과표명,17℃,200 r/min,0.5 mM IPTG유도13h위JcHSP-17.5단백적최가유도표체조건,사용200 mmol/L미서완충액순화단백후,매500 mL균액가득도1.345 mg적전영순단백,해단백재고온(45℃)조건하능구조지평과산탈경매(MDH)발생취합반응,표현출교강적분자반려활성.
