四川大学学报（自然科学版）
四川大學學報（自然科學版）
사천대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE EDITION）
2013年
5期
1109-1118
,共10页
牛可钦%冯进辉%吴洽庆%鲍锦库
牛可欽%馮進輝%吳洽慶%鮑錦庫
우가흠%풍진휘%오흡경%포금고
胰蛋白酶抑制剂%萨尔瓦多型银合欢%温度耐受性%pH耐受性%抑制动力学%圆二色谱
胰蛋白酶抑製劑%薩爾瓦多型銀閤歡%溫度耐受性%pH耐受性%抑製動力學%圓二色譜
이단백매억제제%살이와다형은합환%온도내수성%pH내수성%억제동역학%원이색보
trypsin inhibitor%Leucaena leucocephala cv.Salvador%stability%inhibitory kinetic%CD
本研究从萨尔瓦多型银合欢(Leucaena leucocephala cv.Salvador)种子中分离纯化出一种新的胰蛋白酶抑制剂,即萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白抑制剂(Trypsin Inhibitor fromLeucaena leucocephala cv.Salvador seeds,LlsTI).成熟的种子经粉碎,生理盐水浸提之后,经CM-Sepharose阳离子交换层析得到LlsTI纯品.该胰蛋白抑制剂为19.8 kDa的单体蛋白,其N末端测序结果为KGSYLRDVRG,而其内部则含有一段KTAPLVVGFLK的序列,与已知的蛋白酶抑制剂序列都不同,表明LlsTI为一种新的胰蛋白酶抑制剂,同时也含有一部分与已知Kunitz型抑制剂相保守的碱基.LlsTI对胰蛋白酶的摩尔抑制比近似为1∶1.其对于胰蛋白酶属竞争性抑制剂,其Ki值为2.77×10-10 M.LlsTI对胰蛋白酶的抑制活力表现出对高温和pH变化较高的耐受性.但其活性受100 mM DTT影响.本研究对LlsTI对其它丝氨酸类蛋白酶的抑制作用也做了测定,其中只有胰蛋白酶的活性受到了抑制.根据圆二色谱的分析结果,LlsTI是一种αβ蛋白,其二级结构在室温下的水和缓冲液Tris-HCl (pH7.5)中组成相似.
本研究從薩爾瓦多型銀閤歡(Leucaena leucocephala cv.Salvador)種子中分離純化齣一種新的胰蛋白酶抑製劑,即薩爾瓦多型銀閤歡種子胰蛋白抑製劑(Trypsin Inhibitor fromLeucaena leucocephala cv.Salvador seeds,LlsTI).成熟的種子經粉碎,生理鹽水浸提之後,經CM-Sepharose暘離子交換層析得到LlsTI純品.該胰蛋白抑製劑為19.8 kDa的單體蛋白,其N末耑測序結果為KGSYLRDVRG,而其內部則含有一段KTAPLVVGFLK的序列,與已知的蛋白酶抑製劑序列都不同,錶明LlsTI為一種新的胰蛋白酶抑製劑,同時也含有一部分與已知Kunitz型抑製劑相保守的堿基.LlsTI對胰蛋白酶的摩爾抑製比近似為1∶1.其對于胰蛋白酶屬競爭性抑製劑,其Ki值為2.77×10-10 M.LlsTI對胰蛋白酶的抑製活力錶現齣對高溫和pH變化較高的耐受性.但其活性受100 mM DTT影響.本研究對LlsTI對其它絲氨痠類蛋白酶的抑製作用也做瞭測定,其中隻有胰蛋白酶的活性受到瞭抑製.根據圓二色譜的分析結果,LlsTI是一種αβ蛋白,其二級結構在室溫下的水和緩遲液Tris-HCl (pH7.5)中組成相似.
본연구종살이와다형은합환(Leucaena leucocephala cv.Salvador)충자중분리순화출일충신적이단백매억제제,즉살이와다형은합환충자이단백억제제(Trypsin Inhibitor fromLeucaena leucocephala cv.Salvador seeds,LlsTI).성숙적충자경분쇄,생리염수침제지후,경CM-Sepharose양리자교환층석득도LlsTI순품.해이단백억제제위19.8 kDa적단체단백,기N말단측서결과위KGSYLRDVRG,이기내부칙함유일단KTAPLVVGFLK적서렬,여이지적단백매억제제서렬도불동,표명LlsTI위일충신적이단백매억제제,동시야함유일부분여이지Kunitz형억제제상보수적감기.LlsTI대이단백매적마이억제비근사위1∶1.기대우이단백매속경쟁성억제제,기Ki치위2.77×10-10 M.LlsTI대이단백매적억제활력표현출대고온화pH변화교고적내수성.단기활성수100 mM DTT영향.본연구대LlsTI대기타사안산류단백매적억제작용야주료측정,기중지유이단백매적활성수도료억제.근거원이색보적분석결과,LlsTI시일충αβ단백,기이급결구재실온하적수화완충액Tris-HCl (pH7.5)중조성상사.
