CAJ | 학술논문

为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2) Cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白,构建了pHSIE-Nb (His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb (His-Intein)和pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3种表达载体.分别转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,在不同表达条件下比较,选取可溶性表达最好的载体大量表达,用Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化,并利用Intein自剪切去除标签,纯化纳米抗体.且用制备的纳米抗体作为包被抗体,做双抗体夹心ELISA检测其反应原性.结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达,而融合His-Trx-Intein标签的载体可溶性表达量最高.融合蛋白经pH7、25℃剪切24 h后可以得到不含融合标签的纳米抗体.双抗体夹心ELISA检测,统计学分析,制备的抗PCV2 Cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(P＞0.05),因此制备的纳米抗体是有活性的.本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法,可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程,获得具有活性的无标签的纳米抗体.为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持.
위실현납미항체적간단、고효、저성본표체,재이유적상품화원핵표체재체적기출상,대기진행개조,재파단백N단분별융합3충불동천련융합표첨His-Intein、His-Sumo-Intein화His-Trx-Intein,이본실험실사선적항저원배병독2(PCV2) Cap단백적납미항체기인위파단백,구건료pHSIE-Nb (His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb (His-Intein)화pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3충표체재체.분별전화대장간균BL21(DE3),용IPTG유도융합단백표체,재불동표체조건하비교,선취가용성표체최호적재체대량표체,용Ni-NTA금속오합층석주진행순화,병이용Intein자전절거제표첨,순화납미항체.차용제비적납미항체작위포피항체,주쌍항체협심ELISA검측기반응원성.결과현시3충불동융합표첨적납미항체도가성공표체,이융합His-Trx-Intein표첨적재체가용성표체량최고.융합단백경pH7、25℃전절24 h후가이득도불함융합표첨적납미항체.쌍항체협심ELISA검측,통계학분석,제비적항PCV2 Cap납미항체단백포피적양품조여양성대조조차이불현저(P＞0.05),인차제비적납미항체시유활성적.본연구성공건립일충고효표체、순화납미항체적방법,가이증가단백표체량、가용성화간화단백순화과정,획득구유활성적무표첨적납미항체.위기진일보적납미항체이론연구화생산응용제공기술지지.