畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
9期
1432-1437
,共6页
冷勇%宋振辉%卿家超%翟少华%买买提·艾孜子
冷勇%宋振輝%卿傢超%翟少華%買買提·艾孜子
랭용%송진휘%경가초%적소화%매매제·애자자
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)%M基因%sM基因%sf9细胞%病毒样颗粒
豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)%M基因%sM基因%sf9細胞%病毒樣顆粒
저전염성위장염병독(TGEV)%M기인%sM기인%sf9세포%병독양과립
porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV)%M gene%sM gene%sf9 cells%VLPs
利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M和sM结构蛋白基因,将其分别克隆入载体pFastBacTM Dual,获得转移质粒pFastBacTM Dual-M和pFastBacTMDual-M-sM,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M和Bacmid-M-sM,在Cellfection作用下,将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM.通过Western Blot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:重组蛋白在杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达.将重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM分别感染sf9昆虫细胞,进行TGEV病毒样颗粒(VLPs)的体外组装试验.结果表明,M蛋白在sf9细胞内单独表达,M蛋白和sM在sf9细胞内共同表达,都可形成TGEV病毒样颗粒,而且病毒粒子大小不等,直径在61～101 nm.试验结果为进一步研究TGEV结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据.
利用RT-PCR方法擴增豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)M和sM結構蛋白基因,將其分彆剋隆入載體pFastBacTM Dual,穫得轉移質粒pFastBacTM Dual-M和pFastBacTMDual-M-sM,將重組質粒轉化至DH10Bac感受態細胞,經抗性與藍白斑篩選,穫得桿狀病毒重組質粒Bacmid-M和Bacmid-M-sM,在Cellfection作用下,將桿狀病毒重組質粒轉染昆蟲細胞sf9,穫得重組桿狀病毒rBac-M和rBac-M-sM.通過Western Blot、間接免疫熒光試驗(IFA)進行檢測,結果顯示:重組蛋白在桿狀病毒感染的sf9昆蟲細胞中穫得正確錶達.將重組桿狀病毒rBac-M和rBac-M-sM分彆感染sf9昆蟲細胞,進行TGEV病毒樣顆粒(VLPs)的體外組裝試驗.結果錶明,M蛋白在sf9細胞內單獨錶達,M蛋白和sM在sf9細胞內共同錶達,都可形成TGEV病毒樣顆粒,而且病毒粒子大小不等,直徑在61～101 nm.試驗結果為進一步研究TGEV結構蛋白在病毒裝配過程中的作用提供瞭理論依據.
이용RT-PCR방법확증저전염성위장염병독(TGEV)M화sM결구단백기인,장기분별극륭입재체pFastBacTM Dual,획득전이질립pFastBacTM Dual-M화pFastBacTMDual-M-sM,장중조질립전화지DH10Bac감수태세포,경항성여람백반사선,획득간상병독중조질립Bacmid-M화Bacmid-M-sM,재Cellfection작용하,장간상병독중조질립전염곤충세포sf9,획득중조간상병독rBac-M화rBac-M-sM.통과Western Blot、간접면역형광시험(IFA)진행검측,결과현시:중조단백재간상병독감염적sf9곤충세포중획득정학표체.장중조간상병독rBac-M화rBac-M-sM분별감염sf9곤충세포,진행TGEV병독양과립(VLPs)적체외조장시험.결과표명,M단백재sf9세포내단독표체,M단백화sM재sf9세포내공동표체,도가형성TGEV병독양과립,이차병독입자대소불등,직경재61～101 nm.시험결과위진일보연구TGEV결구단백재병독장배과정중적작용제공료이론의거.
