畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
9期
1349-1354
,共6页
夏明秀%常国斌%陈蓉%翟飞%戴爱琴%马腾%王洪志%徐璐%陈静
夏明秀%常國斌%陳蓉%翟飛%戴愛琴%馬騰%王洪誌%徐璐%陳靜
하명수%상국빈%진용%적비%대애금%마등%왕홍지%서로%진정
Piwil1基因%核心启动子%定点突变%双荧光素酶活性检测系统%NF-Y
Piwil1基因%覈心啟動子%定點突變%雙熒光素酶活性檢測繫統%NF-Y
Piwil1기인%핵심계동자%정점돌변%쌍형광소매활성검측계통%NF-Y
Piwil1 gene%core promoter%point mutation%Dual-Glo(R) Luciferase Assay System%NF-Y
旨在确定Piwil1基因核心启动子活性调控区,预测转录因子结合位点,并探讨转录因子对家禽Piwil1基因核心启动子活性的影响.通过将Piwil1基因启动子系列缺失片段插入到pGL3-basic载体,构建重组体质粒,将重组体分别转染COS-7和GC-1细胞系,使用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定Piwil1基因核心启动子活性调控区,并对调控区进行转录因子结合位点预测;对预测的转录因子NF-Y结合位点进行定点突变,构建重组体质粒,并通过双荧光素酶报告基因检测系统分析其对启动子活性的影响.狼山鸡Piwil1基因的-1 377～-268 bp区域在COS-7和GC-1细胞中都有不同程度的启动活性,-221～+1 bp启动子活性几乎完全丧失,在-268～-221 bp区域有转录因子NF-Y结合位点,定点突变后启动子活性显著下降,认为转录因子NF-Y对启动子活性可能起着重要的调控作用.转录因子NF-Y为Piwil1基因核心启动子区的重要调控元件,为进一步研究Piwil1基因的转录调控机制奠定了理论基础.
旨在確定Piwil1基因覈心啟動子活性調控區,預測轉錄因子結閤位點,併探討轉錄因子對傢禽Piwil1基因覈心啟動子活性的影響.通過將Piwil1基因啟動子繫列缺失片段插入到pGL3-basic載體,構建重組體質粒,將重組體分彆轉染COS-7和GC-1細胞繫,使用雙熒光素酶報告基因檢測繫統測定其轉錄活性,確定Piwil1基因覈心啟動子活性調控區,併對調控區進行轉錄因子結閤位點預測;對預測的轉錄因子NF-Y結閤位點進行定點突變,構建重組體質粒,併通過雙熒光素酶報告基因檢測繫統分析其對啟動子活性的影響.狼山鷄Piwil1基因的-1 377～-268 bp區域在COS-7和GC-1細胞中都有不同程度的啟動活性,-221～+1 bp啟動子活性幾乎完全喪失,在-268～-221 bp區域有轉錄因子NF-Y結閤位點,定點突變後啟動子活性顯著下降,認為轉錄因子NF-Y對啟動子活性可能起著重要的調控作用.轉錄因子NF-Y為Piwil1基因覈心啟動子區的重要調控元件,為進一步研究Piwil1基因的轉錄調控機製奠定瞭理論基礎.
지재학정Piwil1기인핵심계동자활성조공구,예측전록인자결합위점,병탐토전록인자대가금Piwil1기인핵심계동자활성적영향.통과장Piwil1기인계동자계렬결실편단삽입도pGL3-basic재체,구건중조체질립,장중조체분별전염COS-7화GC-1세포계,사용쌍형광소매보고기인검측계통측정기전록활성,학정Piwil1기인핵심계동자활성조공구,병대조공구진행전록인자결합위점예측;대예측적전록인자NF-Y결합위점진행정점돌변,구건중조체질립,병통과쌍형광소매보고기인검측계통분석기대계동자활성적영향.랑산계Piwil1기인적-1 377～-268 bp구역재COS-7화GC-1세포중도유불동정도적계동활성,-221～+1 bp계동자활성궤호완전상실,재-268～-221 bp구역유전록인자NF-Y결합위점,정점돌변후계동자활성현저하강,인위전록인자NF-Y대계동자활성가능기착중요적조공작용.전록인자NF-Y위Piwil1기인핵심계동자구적중요조공원건,위진일보연구Piwil1기인적전록조공궤제전정료이론기출.
