东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
9期
86-90
,共5页
祁光宇%刘斌%陈晓宇%王赛错%苟慧天%黄银君%穆克斌%刘学荣
祁光宇%劉斌%陳曉宇%王賽錯%茍慧天%黃銀君%穆剋斌%劉學榮
기광우%류빈%진효우%왕새착%구혜천%황은군%목극빈%류학영
小反刍兽疫病毒%N1-N5基因%搭桥PCR%原核表达%可溶性%SDS-PAGE%Western-blot
小反芻獸疫病毒%N1-N5基因%搭橋PCR%原覈錶達%可溶性%SDS-PAGE%Western-blot
소반추수역병독%N1-N5기인%탑교PCR%원핵표체%가용성%SDS-PAGE%Western-blot
PPRV%N1-N5 gene%Overlap-extension PCR%prokaryotic expression%soluble%SDS-PAGE%Western-blot
根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV) Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,在此基础上设计2对特异引物分别对N1、N5基因扩增和对N1和N5基因进行搭桥PCR连接,经测序分析后将N1-Ns基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,构建pET-32a-N1-N5质粒.将pET-32a-N1-N5转化于TransB (DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达,将纯化重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定.结果表明,所表达蛋白以可溶性形式表达并具有能与PPRV阳性标准血清发生特异性反应,为建立快速检测小反当兽疫病毒抗体水平诊断方法奠定基础.
根據GenBank中登錄小反芻獸疫病毒(PPRV) Nigeria 75/1株N基因序列進行人工閤成,在此基礎上設計2對特異引物分彆對N1、N5基因擴增和對N1和N5基因進行搭橋PCR連接,經測序分析後將N1-Ns基因片段和原覈錶達載體pET-32a(+)相連接,構建pET-32a-N1-N5質粒.將pET-32a-N1-N5轉化于TransB (DE3)原覈錶達感受態細胞後用IPTG誘導錶達,將純化重組蛋白進行SDS-PAGE分析和Western-blot鑒定.結果錶明,所錶達蛋白以可溶性形式錶達併具有能與PPRV暘性標準血清髮生特異性反應,為建立快速檢測小反噹獸疫病毒抗體水平診斷方法奠定基礎.
근거GenBank중등록소반추수역병독(PPRV) Nigeria 75/1주N기인서렬진행인공합성,재차기출상설계2대특이인물분별대N1、N5기인확증화대N1화N5기인진행탑교PCR련접,경측서분석후장N1-Ns기인편단화원핵표체재체pET-32a(+)상련접,구건pET-32a-N1-N5질립.장pET-32a-N1-N5전화우TransB (DE3)원핵표체감수태세포후용IPTG유도표체,장순화중조단백진행SDS-PAGE분석화Western-blot감정.결과표명,소표체단백이가용성형식표체병구유능여PPRV양성표준혈청발생특이성반응,위건립쾌속검측소반당수역병독항체수평진단방법전정기출.
