东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
9期
57-62,封2
,共7页
秦欣欣%孙红梅%褚文辉%王大涛%郭倩倩%章秀婷%李春义
秦訢訢%孫紅梅%褚文輝%王大濤%郭倩倩%章秀婷%李春義
진흔흔%손홍매%저문휘%왕대도%곽천천%장수정%리춘의
鹿茸再生%galectin-1基因%RNAi%生茸骨膜细胞
鹿茸再生%galectin-1基因%RNAi%生茸骨膜細胞
록용재생%galectin-1기인%RNAi%생용골막세포
antler regeneration%galectin-1 gene%RNAi%antlerogenic periosteal cell
构建东北梅花鹿galectin-1基因特异小分子干扰RNA(shRNAs)真核干扰载体,并获得稳定感染生茸区骨膜细胞系.设计2对galectin-1 mRNA特异性shRNAs,两端分别带有Cla Ⅰ/Mlu Ⅰ酶切位点和一个9 nt发夹结构,通过基因克隆技术将其插入真核表达质粒pLVTHM中,构建galectin-1 shRNA表达载体,利用PCR和测序筛选出阳性质粒.将重组质粒与PPAX及pMD2.G共转染到293t细胞中,在倒置显微镜下观察转染效果并收集、浓缩病毒质粒,感染生茸区骨膜细胞.结果表明,成功构建东北梅花鹿alectin-1基因RNAi载体,获得稳定传代被感染生茸区骨膜细胞系,为进一步研究g alectin-1基因在鹿茸再生中的作用奠定基础.
構建東北梅花鹿galectin-1基因特異小分子榦擾RNA(shRNAs)真覈榦擾載體,併穫得穩定感染生茸區骨膜細胞繫.設計2對galectin-1 mRNA特異性shRNAs,兩耑分彆帶有Cla Ⅰ/Mlu Ⅰ酶切位點和一箇9 nt髮夾結構,通過基因剋隆技術將其插入真覈錶達質粒pLVTHM中,構建galectin-1 shRNA錶達載體,利用PCR和測序篩選齣暘性質粒.將重組質粒與PPAX及pMD2.G共轉染到293t細胞中,在倒置顯微鏡下觀察轉染效果併收集、濃縮病毒質粒,感染生茸區骨膜細胞.結果錶明,成功構建東北梅花鹿alectin-1基因RNAi載體,穫得穩定傳代被感染生茸區骨膜細胞繫,為進一步研究g alectin-1基因在鹿茸再生中的作用奠定基礎.
구건동북매화록galectin-1기인특이소분자간우RNA(shRNAs)진핵간우재체,병획득은정감염생용구골막세포계.설계2대galectin-1 mRNA특이성shRNAs,량단분별대유Cla Ⅰ/Mlu Ⅰ매절위점화일개9 nt발협결구,통과기인극륭기술장기삽입진핵표체질립pLVTHM중,구건galectin-1 shRNA표체재체,이용PCR화측서사선출양성질립.장중조질립여PPAX급pMD2.G공전염도293t세포중,재도치현미경하관찰전염효과병수집、농축병독질립,감염생용구골막세포.결과표명,성공구건동북매화록alectin-1기인RNAi재체,획득은정전대피감염생용구골막세포계,위진일보연구g alectin-1기인재록용재생중적작용전정기출.
