安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2013年
9期
995-1000
,共6页
张婧%章萍萍%祁培培%吴莉莉%刘超%潘卫%邓松华
張婧%章萍萍%祁培培%吳莉莉%劉超%潘衛%鄧鬆華
장청%장평평%기배배%오리리%류초%반위%산송화
免疫球蛋白M%免疫球蛋白μ链%酶联免疫吸附测定法%单克隆%抗体
免疫毬蛋白M%免疫毬蛋白μ鏈%酶聯免疫吸附測定法%單剋隆%抗體
면역구단백M%면역구단백μ련%매련면역흡부측정법%단극륭%항체
IgM%immunoglobulin Mμ chain%ELISA%monoclonal%antibodies
目的 全基因合成并原核表达免疫球蛋白M的重链(IgMμ链)及其各肽段,与天然的IgM、IgMμ链和IgG进行免疫原性的分析比较,进一步了解IgMμ链恒定区的结构与功能.方法 根据GenBank数据库IgMμ链恒定区(CH1-CH4)的cDNA序列并进行必要的大肠杆菌密码子优化,利用重叠延伸PCR (OE-PCR)体外基因合成人IgMμ链恒定区全长(CH1-CH4)及其截断片段CH1-CH2和CH3-CH4.原核表达并纯化相应的3种融合蛋白PET32a-rMμCH1-CH4、PET32a-rMμCH1-CH2和PET32a-rMμCH3-CH4,并分别免疫BALB/c小鼠.同时设天然人IgM、IgMμ链和IgG免疫组为对照.再用ELISA法检测6种血清,分析比较其抗原性及免疫原性.结果 利用OE-PCR方法体外成功合成1359 bp的IgMμ链(CH1-CH4)全长基因、651 bp的IgMμ链CH1CH2和708 bp的IgMμ链CH3CH4,并构建相应原核表达质粒PET32a-rMμ1-4、PET32a-rMμ1-2和PET32a-rMμ3-4,血清ELISA检测结果显示:①IgG免疫原性＞IgM＞ IgMμ链＞ rMμ1-4＞rMμ1-2＞ rMμ3-4;②IgM免疫的血清与IgG有较强的交叉反应性,IgG免疫的血清与IgM也存在较强的交叉反应性;IgMμ链和重组μ链的各肽段免疫的血清与IgG均无明显的交叉反应性.结论 重组的IgMμ链及其各肽段与天然IgMμ链有着相似的免疫原性和特异性,为基因工程得到抗人IgMμ链单克隆抗体奠定了研究基础.
目的 全基因閤成併原覈錶達免疫毬蛋白M的重鏈(IgMμ鏈)及其各肽段,與天然的IgM、IgMμ鏈和IgG進行免疫原性的分析比較,進一步瞭解IgMμ鏈恆定區的結構與功能.方法 根據GenBank數據庫IgMμ鏈恆定區(CH1-CH4)的cDNA序列併進行必要的大腸桿菌密碼子優化,利用重疊延伸PCR (OE-PCR)體外基因閤成人IgMμ鏈恆定區全長(CH1-CH4)及其截斷片段CH1-CH2和CH3-CH4.原覈錶達併純化相應的3種融閤蛋白PET32a-rMμCH1-CH4、PET32a-rMμCH1-CH2和PET32a-rMμCH3-CH4,併分彆免疫BALB/c小鼠.同時設天然人IgM、IgMμ鏈和IgG免疫組為對照.再用ELISA法檢測6種血清,分析比較其抗原性及免疫原性.結果 利用OE-PCR方法體外成功閤成1359 bp的IgMμ鏈(CH1-CH4)全長基因、651 bp的IgMμ鏈CH1CH2和708 bp的IgMμ鏈CH3CH4,併構建相應原覈錶達質粒PET32a-rMμ1-4、PET32a-rMμ1-2和PET32a-rMμ3-4,血清ELISA檢測結果顯示:①IgG免疫原性＞IgM＞ IgMμ鏈＞ rMμ1-4＞rMμ1-2＞ rMμ3-4;②IgM免疫的血清與IgG有較彊的交扠反應性,IgG免疫的血清與IgM也存在較彊的交扠反應性;IgMμ鏈和重組μ鏈的各肽段免疫的血清與IgG均無明顯的交扠反應性.結論 重組的IgMμ鏈及其各肽段與天然IgMμ鏈有著相似的免疫原性和特異性,為基因工程得到抗人IgMμ鏈單剋隆抗體奠定瞭研究基礎.
목적 전기인합성병원핵표체면역구단백M적중련(IgMμ련)급기각태단,여천연적IgM、IgMμ련화IgG진행면역원성적분석비교,진일보료해IgMμ련항정구적결구여공능.방법 근거GenBank수거고IgMμ련항정구(CH1-CH4)적cDNA서렬병진행필요적대장간균밀마자우화,이용중첩연신PCR (OE-PCR)체외기인합성인IgMμ련항정구전장(CH1-CH4)급기절단편단CH1-CH2화CH3-CH4.원핵표체병순화상응적3충융합단백PET32a-rMμCH1-CH4、PET32a-rMμCH1-CH2화PET32a-rMμCH3-CH4,병분별면역BALB/c소서.동시설천연인IgM、IgMμ련화IgG면역조위대조.재용ELISA법검측6충혈청,분석비교기항원성급면역원성.결과 이용OE-PCR방법체외성공합성1359 bp적IgMμ련(CH1-CH4)전장기인、651 bp적IgMμ련CH1CH2화708 bp적IgMμ련CH3CH4,병구건상응원핵표체질립PET32a-rMμ1-4、PET32a-rMμ1-2화PET32a-rMμ3-4,혈청ELISA검측결과현시:①IgG면역원성＞IgM＞ IgMμ련＞ rMμ1-4＞rMμ1-2＞ rMμ3-4;②IgM면역적혈청여IgG유교강적교차반응성,IgG면역적혈청여IgM야존재교강적교차반응성;IgMμ련화중조μ련적각태단면역적혈청여IgG균무명현적교차반응성.결론 중조적IgMμ련급기각태단여천연IgMμ련유착상사적면역원성화특이성,위기인공정득도항인IgMμ련단극륭항체전정료연구기출.
