中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2014年
9期
1218-1223
,共6页
蒋杞英%张智%胡延忠%王明丽%马远方
蔣杞英%張智%鬍延忠%王明麗%馬遠方
장기영%장지%호연충%왕명려%마원방
热休克转录因子1%SV40T抗原%转染%逆转录病毒载体%小鼠胚胎成纤维细胞
熱休剋轉錄因子1%SV40T抗原%轉染%逆轉錄病毒載體%小鼠胚胎成纖維細胞
열휴극전록인자1%SV40T항원%전염%역전록병독재체%소서배태성섬유세포
Heat shock transcription factor 1%SV40T-antigen%Transfection%Retroviral vector%Mouse embryo fibroblasts
目的:重建热休克转录因子1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)过表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系,为进一步研究Hsf1的功能提供实验模型.方法:将携带Hsf1全长基因的逆转录病毒载体pWZL-blast-flag-Hsf1,通过瞬时转染的方法,转染产生病毒的小鼠包装细胞293 Phoenix.用病毒上清直接感染MEF/Hsf1-/-细胞,建立Hsf1稳定表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系.通过Western blot实验,检测Hsf1和SV40T抗原(T-antigen,T-ag)蛋白的表达.结果:Hsf1蛋白在MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞中的表达比WT/MEF细胞强,而在MEF/Hsf1-/-细胞中没有明显表达.SV40T-ag蛋白在MEF/Hsf1-/-细胞中的表达明显比WT/MEF细胞和MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞强,而SV40T-ag蛋白在WT/MEF细胞中的表达强于MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞.结论:成功建立了MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系;Hsf1参与了对SV40T-ag蛋白的表达调控.
目的:重建熱休剋轉錄因子1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)過錶達的MEF/Hsf1-/-/Hsf1細胞繫,為進一步研究Hsf1的功能提供實驗模型.方法:將攜帶Hsf1全長基因的逆轉錄病毒載體pWZL-blast-flag-Hsf1,通過瞬時轉染的方法,轉染產生病毒的小鼠包裝細胞293 Phoenix.用病毒上清直接感染MEF/Hsf1-/-細胞,建立Hsf1穩定錶達的MEF/Hsf1-/-/Hsf1細胞繫.通過Western blot實驗,檢測Hsf1和SV40T抗原(T-antigen,T-ag)蛋白的錶達.結果:Hsf1蛋白在MEF/Hsf1-/-/Hsf1細胞中的錶達比WT/MEF細胞彊,而在MEF/Hsf1-/-細胞中沒有明顯錶達.SV40T-ag蛋白在MEF/Hsf1-/-細胞中的錶達明顯比WT/MEF細胞和MEF/Hsf1-/-/Hsf1細胞彊,而SV40T-ag蛋白在WT/MEF細胞中的錶達彊于MEF/Hsf1-/-/Hsf1細胞.結論:成功建立瞭MEF/Hsf1-/-/Hsf1細胞繫;Hsf1參與瞭對SV40T-ag蛋白的錶達調控.
목적:중건열휴극전록인자1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)과표체적MEF/Hsf1-/-/Hsf1세포계,위진일보연구Hsf1적공능제공실험모형.방법:장휴대Hsf1전장기인적역전록병독재체pWZL-blast-flag-Hsf1,통과순시전염적방법,전염산생병독적소서포장세포293 Phoenix.용병독상청직접감염MEF/Hsf1-/-세포,건립Hsf1은정표체적MEF/Hsf1-/-/Hsf1세포계.통과Western blot실험,검측Hsf1화SV40T항원(T-antigen,T-ag)단백적표체.결과:Hsf1단백재MEF/Hsf1-/-/Hsf1세포중적표체비WT/MEF세포강,이재MEF/Hsf1-/-세포중몰유명현표체.SV40T-ag단백재MEF/Hsf1-/-세포중적표체명현비WT/MEF세포화MEF/Hsf1-/-/Hsf1세포강,이SV40T-ag단백재WT/MEF세포중적표체강우MEF/Hsf1-/-/Hsf1세포.결론:성공건립료MEF/Hsf1-/-/Hsf1세포계;Hsf1삼여료대SV40T-ag단백적표체조공.
