四川动物
四川動物
사천동물
SICHUAN JOURNAL OF ZOOLOGY
2013年
1期
44-50
,共7页
白光明%罗公明%王晔%李瑛%高荣
白光明%囉公明%王曄%李瑛%高榮
백광명%라공명%왕엽%리영%고영
猪β-内啡肽基因%克隆%高效表达%壳聚糖%细胞转染
豬β-內啡肽基因%剋隆%高效錶達%殼聚糖%細胞轉染
저β-내배태기인%극륭%고효표체%각취당%세포전염
目的 克隆猪β-内啡肽基因,研究其体外原核、真核表达,探索高效表达目的基因的新型纳米材料,为进一步研究β-内啡肽对动物免疫应答和应激调节等方面的作用奠定基础.方法 利用基因延伸重叠PCR克隆β-内啡肽的基因cDNA,双酶切后插入VR1020、pGEX-4T-1,构建其真核、原核表达载体；以不同浓度的IPTG诱导表达重组融合蛋白,并作SDS-PAGE和RT-PCR分析目的基因原核表达情况；利用壳聚糖及其修饰分子制备纳米颗粒包装重组真核表达质粒,体外转染HEK2.93细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析β-内啡肽基因在真核细胞的表达.结果 成功克隆了猪β-内啡肽基因,并构建获得其原核和真核表达载体；不同浓度的IPTG诱导后,在29.7 kDa的位置出现了新的蛋白条带,而原来的26.2 kDa处的GST标签蛋白条带消失.说明目的基因已经和GST融合产生了新的融合蛋白；壳聚糖及其聚乙二醇和聚乙烯亚胺接枝修饰分子(mPEG-PEI-CS)纳米颗粒包裹VREP转染HEK293细胞,48 h后收集细胞,RT-PCR和ELISA检测显示VREP能够在HEK293细胞中高效地转录表达β-内啡肽.结论 本实验成功克隆了猪的β-内啡肽基因,并成功进行了原核及真核细胞表达分析,壳聚糖修饰分子纳米颗粒包装可高效表达目的基因,为进一步的动物实验奠定了基础.
目的 剋隆豬β-內啡肽基因,研究其體外原覈、真覈錶達,探索高效錶達目的基因的新型納米材料,為進一步研究β-內啡肽對動物免疫應答和應激調節等方麵的作用奠定基礎.方法 利用基因延伸重疊PCR剋隆β-內啡肽的基因cDNA,雙酶切後插入VR1020、pGEX-4T-1,構建其真覈、原覈錶達載體；以不同濃度的IPTG誘導錶達重組融閤蛋白,併作SDS-PAGE和RT-PCR分析目的基因原覈錶達情況；利用殼聚糖及其脩飾分子製備納米顆粒包裝重組真覈錶達質粒,體外轉染HEK2.93細胞,提取總RNA進行RT-PCR分析β-內啡肽基因在真覈細胞的錶達.結果 成功剋隆瞭豬β-內啡肽基因,併構建穫得其原覈和真覈錶達載體；不同濃度的IPTG誘導後,在29.7 kDa的位置齣現瞭新的蛋白條帶,而原來的26.2 kDa處的GST標籤蛋白條帶消失.說明目的基因已經和GST融閤產生瞭新的融閤蛋白；殼聚糖及其聚乙二醇和聚乙烯亞胺接枝脩飾分子(mPEG-PEI-CS)納米顆粒包裹VREP轉染HEK293細胞,48 h後收集細胞,RT-PCR和ELISA檢測顯示VREP能夠在HEK293細胞中高效地轉錄錶達β-內啡肽.結論 本實驗成功剋隆瞭豬的β-內啡肽基因,併成功進行瞭原覈及真覈細胞錶達分析,殼聚糖脩飾分子納米顆粒包裝可高效錶達目的基因,為進一步的動物實驗奠定瞭基礎.
목적 극륭저β-내배태기인,연구기체외원핵、진핵표체,탐색고효표체목적기인적신형납미재료,위진일보연구β-내배태대동물면역응답화응격조절등방면적작용전정기출.방법 이용기인연신중첩PCR극륭β-내배태적기인cDNA,쌍매절후삽입VR1020、pGEX-4T-1,구건기진핵、원핵표체재체；이불동농도적IPTG유도표체중조융합단백,병작SDS-PAGE화RT-PCR분석목적기인원핵표체정황；이용각취당급기수식분자제비납미과립포장중조진핵표체질립,체외전염HEK2.93세포,제취총RNA진행RT-PCR분석β-내배태기인재진핵세포적표체.결과 성공극륭료저β-내배태기인,병구건획득기원핵화진핵표체재체；불동농도적IPTG유도후,재29.7 kDa적위치출현료신적단백조대,이원래적26.2 kDa처적GST표첨단백조대소실.설명목적기인이경화GST융합산생료신적융합단백；각취당급기취을이순화취을희아알접지수식분자(mPEG-PEI-CS)납미과립포과VREP전염HEK293세포,48 h후수집세포,RT-PCR화ELISA검측현시VREP능구재HEK293세포중고효지전록표체β-내배태.결론 본실험성공극륭료저적β-내배태기인,병성공진행료원핵급진핵세포표체분석,각취당수식분자납미과립포장가고효표체목적기인,위진일보적동물실험전정료기출.
