胃肠病学和肝病学杂志
胃腸病學和肝病學雜誌
위장병학화간병학잡지
CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY
2009年
10期
915-918
,共4页
火睿%郑勇%田书信%周婷%孙侃%常向云%陈卫刚%李睿
火睿%鄭勇%田書信%週婷%孫侃%常嚮雲%陳衛剛%李睿
화예%정용%전서신%주정%손간%상향운%진위강%리예
TIMP-1%肝星状细胞%基因转染
TIMP-1%肝星狀細胞%基因轉染
TIMP-1%간성상세포%기인전염
目的 提高TIMP-1小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA在大鼠肝星状细胞HSC-T6中的转染效率.方法 构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA,采用阳离子脂质体介导法将pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA质粒转染入HSC-T6细胞,实验根据质粒DNA和阳离子脂质体LipofectamineTM 2000的不同比例分为5组:2 μg/0μL、2 μg/4 μL、2 μg/6 μL、2 μg/8 μL、2 μg/10 μL,同时设空白对照组.转染48 h后,应用激光共聚焦显微镜观察各组转染情况,同时用流式细胞仪计算转染效率.结果 激光共聚焦显微镜观察和流式细胞仪检测均说明质粒与脂质体比例为2 μg/8 μL组转染效率显著高于其余各比例组,差异具有统计学意义.转染效率与脂质体和质粒的比例有关.结论 按照合适的质粒和脂质体比例,质粒pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA转染HSC-T6可达较高转染效率,是转染HSC-T6较为理想的瞬时表达载体.
目的 提高TIMP-1小榦擾RNA真覈錶達載體pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA在大鼠肝星狀細胞HSC-T6中的轉染效率.方法 構建攜帶綠色熒光蛋白(GFP)基因的小榦擾RNA真覈錶達載體pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA,採用暘離子脂質體介導法將pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA質粒轉染入HSC-T6細胞,實驗根據質粒DNA和暘離子脂質體LipofectamineTM 2000的不同比例分為5組:2 μg/0μL、2 μg/4 μL、2 μg/6 μL、2 μg/8 μL、2 μg/10 μL,同時設空白對照組.轉染48 h後,應用激光共聚焦顯微鏡觀察各組轉染情況,同時用流式細胞儀計算轉染效率.結果 激光共聚焦顯微鏡觀察和流式細胞儀檢測均說明質粒與脂質體比例為2 μg/8 μL組轉染效率顯著高于其餘各比例組,差異具有統計學意義.轉染效率與脂質體和質粒的比例有關.結論 按照閤適的質粒和脂質體比例,質粒pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA轉染HSC-T6可達較高轉染效率,是轉染HSC-T6較為理想的瞬時錶達載體.
목적 제고TIMP-1소간우RNA진핵표체재체pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA재대서간성상세포HSC-T6중적전염효솔.방법 구건휴대록색형광단백(GFP)기인적소간우RNA진핵표체재체pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA,채용양리자지질체개도법장pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA질립전염입HSC-T6세포,실험근거질립DNA화양리자지질체LipofectamineTM 2000적불동비례분위5조:2 μg/0μL、2 μg/4 μL、2 μg/6 μL、2 μg/8 μL、2 μg/10 μL,동시설공백대조조.전염48 h후,응용격광공취초현미경관찰각조전염정황,동시용류식세포의계산전염효솔.결과 격광공취초현미경관찰화류식세포의검측균설명질립여지질체비례위2 μg/8 μL조전염효솔현저고우기여각비례조,차이구유통계학의의.전염효솔여지질체화질립적비례유관.결론 안조합괄적질립화지질체비례,질립pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA전염HSC-T6가체교고전염효솔,시전염HSC-T6교위이상적순시표체재체.
