河北大学学报（自然科学版）
河北大學學報（自然科學版）
하북대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HEBEI UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2013年
6期
642-647
,共6页
谢园园%曹文静%赵帅%樊武舫%吴琛
謝園園%曹文靜%趙帥%樊武舫%吳琛
사완완%조문정%조수%번무방%오침
LGR5基因%shRNA真核表达载体%胃腺癌细胞MKN28
LGR5基因%shRNA真覈錶達載體%胃腺癌細胞MKN28
LGR5기인%shRNA진핵표체재체%위선암세포MKN28
LGR5%short hairpin RNA eukaryotic expression vector%MKN28
构建并鉴定LGR5的shRNA真核表达载体,研究其对胃腺癌细胞LGR5基因表达的抑制作用.根据GenBank数据库提供的LGR5 cDNA序列,选择设计一段靶向LGR5的shRNA序列,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中,构建重组载体并测序鉴定.将构建成功的特异性表达载体(pG-PU6/GFP/Neo-LGR5)转染人胃腺癌细胞系后,应用荧光显微镜分析转染效率.利用荧光实时定量PCR对细胞内源性LGR5的表达进行检测.测序结果表明:靶向LGR5的重组pGPU6/GFP/Neo-LGR5载体构建成功.荧光实时定量PCR结果显示:与对照组相比,LGR5 shRNA真核表达载体可以使胃腺癌细胞中LGR5的mRNA水平明显降低78.96％ (P＜0.01).本工作可以为进一步研究LGR5在胃癌发生发展中的作用提供帮助.
構建併鑒定LGR5的shRNA真覈錶達載體,研究其對胃腺癌細胞LGR5基因錶達的抑製作用.根據GenBank數據庫提供的LGR5 cDNA序列,選擇設計一段靶嚮LGR5的shRNA序列,經退火成互補雙鏈,剋隆到質粒pGPU6/GFP/Neo中,構建重組載體併測序鑒定.將構建成功的特異性錶達載體(pG-PU6/GFP/Neo-LGR5)轉染人胃腺癌細胞繫後,應用熒光顯微鏡分析轉染效率.利用熒光實時定量PCR對細胞內源性LGR5的錶達進行檢測.測序結果錶明:靶嚮LGR5的重組pGPU6/GFP/Neo-LGR5載體構建成功.熒光實時定量PCR結果顯示:與對照組相比,LGR5 shRNA真覈錶達載體可以使胃腺癌細胞中LGR5的mRNA水平明顯降低78.96％ (P＜0.01).本工作可以為進一步研究LGR5在胃癌髮生髮展中的作用提供幫助.
구건병감정LGR5적shRNA진핵표체재체,연구기대위선암세포LGR5기인표체적억제작용.근거GenBank수거고제공적LGR5 cDNA서렬,선택설계일단파향LGR5적shRNA서렬,경퇴화성호보쌍련,극륭도질립pGPU6/GFP/Neo중,구건중조재체병측서감정.장구건성공적특이성표체재체(pG-PU6/GFP/Neo-LGR5)전염인위선암세포계후,응용형광현미경분석전염효솔.이용형광실시정량PCR대세포내원성LGR5적표체진행검측.측서결과표명:파향LGR5적중조pGPU6/GFP/Neo-LGR5재체구건성공.형광실시정량PCR결과현시:여대조조상비,LGR5 shRNA진핵표체재체가이사위선암세포중LGR5적mRNA수평명현강저78.96％ (P＜0.01).본공작가이위진일보연구LGR5재위암발생발전중적작용제공방조.
