生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2011年
3期
6-10
,共5页
张伟%黄旭东%韩小波%任珊珊%王小柯%李艳艳%唐胜建
張偉%黃旭東%韓小波%任珊珊%王小柯%李豔豔%唐勝建
장위%황욱동%한소파%임산산%왕소가%리염염%당성건
FOXL2%BPES%酵母双杂交
FOXL2%BPES%酵母雙雜交
FOXL2%BPES%효모쌍잡교
目的:用FOXL2编码区片段构建酵母双杂交诱饵质粒并对诱饵质粒进行自激活活性及毒性检测.方法:PCR扩增FOXl2编码区DNA片段,克隆入pGBKT7质粒,转化至DH-5α大量扩增后提取质粒,经PCR、酶切和测序验证,再转化至Y187酵母菌株中用缺陷培养基筛选并进行自激活和毒性检测.结果:获得FOXL2基因1137bp片段,并成功将人类正常和一突变型FOXL2编码区克隆人pGBKT7中,经检测在SD/-Trp/X-α-Gal单缺培养基平板上无蓝色菌斑出现,在SD/-Ade/-Trp培养基平板无生长.同时在SD/-Trp/Kana(20μg/ml)培养24h后测得菌液OD600≥0.8,说明重组诱质粒无自激活活性和酵母毒性,满足作为诱饵质粒的条件.结论:成功构建了正常及突变型的FOXL2酵母杂交诱饵质粒;为进一步利用酵母双杂交技术研究与FOXL2相互作用的蛋白打下坚实基础.
目的:用FOXL2編碼區片段構建酵母雙雜交誘餌質粒併對誘餌質粒進行自激活活性及毒性檢測.方法:PCR擴增FOXl2編碼區DNA片段,剋隆入pGBKT7質粒,轉化至DH-5α大量擴增後提取質粒,經PCR、酶切和測序驗證,再轉化至Y187酵母菌株中用缺陷培養基篩選併進行自激活和毒性檢測.結果:穫得FOXL2基因1137bp片段,併成功將人類正常和一突變型FOXL2編碼區剋隆人pGBKT7中,經檢測在SD/-Trp/X-α-Gal單缺培養基平闆上無藍色菌斑齣現,在SD/-Ade/-Trp培養基平闆無生長.同時在SD/-Trp/Kana(20μg/ml)培養24h後測得菌液OD600≥0.8,說明重組誘質粒無自激活活性和酵母毒性,滿足作為誘餌質粒的條件.結論:成功構建瞭正常及突變型的FOXL2酵母雜交誘餌質粒;為進一步利用酵母雙雜交技術研究與FOXL2相互作用的蛋白打下堅實基礎.
목적:용FOXL2편마구편단구건효모쌍잡교유이질립병대유이질립진행자격활활성급독성검측.방법:PCR확증FOXl2편마구DNA편단,극륭입pGBKT7질립,전화지DH-5α대량확증후제취질립,경PCR、매절화측서험증,재전화지Y187효모균주중용결함배양기사선병진행자격활화독성검측.결과:획득FOXL2기인1137bp편단,병성공장인류정상화일돌변형FOXL2편마구극륭인pGBKT7중,경검측재SD/-Trp/X-α-Gal단결배양기평판상무람색균반출현,재SD/-Ade/-Trp배양기평판무생장.동시재SD/-Trp/Kana(20μg/ml)배양24h후측득균액OD600≥0.8,설명중조유질립무자격활활성화효모독성,만족작위유이질립적조건.결론:성공구건료정상급돌변형적FOXL2효모잡교유이질립;위진일보이용효모쌍잡교기술연구여FOXL2상호작용적단백타하견실기출.
