生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2011年
3期
218-222,240
,共6页
曹锐%宋琴%陈平%梁宋平%王贤纯
曹銳%宋琴%陳平%樑宋平%王賢純
조예%송금%진평%량송평%왕현순
温和过甲酸氧化%串联质谱%膜蛋白%蛋白质组学
溫和過甲痠氧化%串聯質譜%膜蛋白%蛋白質組學
온화과갑산양화%천련질보%막단백%단백질조학
由于膜蛋白质尤其是内在膜蛋白的强疏水性,分析和鉴定质膜蛋白质仍然是以质谱为基础的蛋白质组学的方法中的一个难点.过甲酸氧化是一种应用广泛的打开二硫键的方法,温和的过甲酸试剂能完全的将半胱氨酸转化为半胱磺酸,将甲硫氨酸转化为甲硫氨酸砜,从而使目的蛋白更易溶于水介质.采用蔗糖密度梯度离心法纯化得到大鼠大脑皮层质膜,提取的质膜蛋白质经温和过甲酸氧化处理后经胰酶酶解消化得到肽段,利用LC-MS/MS对所得肽段进行质谱分析,采集的原始数据用Mascot软件进行库搜寻鉴定.此方法是研究质膜蛋白质的新方法,温和过甲酸氧化显示出很好的氧化效果却避免其它不利于鉴定的副反应.从大鼠大脑皮层膜提取物共鉴定出220种蛋白质,其中73种为整合膜蛋白,证明对质膜蛋白质直接进行温和过甲酸氧化然后酶解的方法辅助酶解可以有效的鉴定质膜蛋白质.
由于膜蛋白質尤其是內在膜蛋白的彊疏水性,分析和鑒定質膜蛋白質仍然是以質譜為基礎的蛋白質組學的方法中的一箇難點.過甲痠氧化是一種應用廣汎的打開二硫鍵的方法,溫和的過甲痠試劑能完全的將半胱氨痠轉化為半胱磺痠,將甲硫氨痠轉化為甲硫氨痠砜,從而使目的蛋白更易溶于水介質.採用蔗糖密度梯度離心法純化得到大鼠大腦皮層質膜,提取的質膜蛋白質經溫和過甲痠氧化處理後經胰酶酶解消化得到肽段,利用LC-MS/MS對所得肽段進行質譜分析,採集的原始數據用Mascot軟件進行庫搜尋鑒定.此方法是研究質膜蛋白質的新方法,溫和過甲痠氧化顯示齣很好的氧化效果卻避免其它不利于鑒定的副反應.從大鼠大腦皮層膜提取物共鑒定齣220種蛋白質,其中73種為整閤膜蛋白,證明對質膜蛋白質直接進行溫和過甲痠氧化然後酶解的方法輔助酶解可以有效的鑒定質膜蛋白質.
유우막단백질우기시내재막단백적강소수성,분석화감정질막단백질잉연시이질보위기출적단백질조학적방법중적일개난점.과갑산양화시일충응용엄범적타개이류건적방법,온화적과갑산시제능완전적장반광안산전화위반광광산,장갑류안산전화위갑류안산풍,종이사목적단백경역용우수개질.채용자당밀도제도리심법순화득도대서대뇌피층질막,제취적질막단백질경온화과갑산양화처리후경이매매해소화득도태단,이용LC-MS/MS대소득태단진행질보분석,채집적원시수거용Mascot연건진행고수심감정.차방법시연구질막단백질적신방법,온화과갑산양화현시출흔호적양화효과각피면기타불리우감정적부반응.종대서대뇌피층막제취물공감정출220충단백질,기중73충위정합막단백,증명대질막단백질직접진행온화과갑산양화연후매해적방법보조매해가이유효적감정질막단백질.
