医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2011年
6期
70-76
,共7页
壳聚糖-丝素%支架%骨髓间充质干细胞%软骨%TGF-β1
殼聚糖-絲素%支架%骨髓間充質榦細胞%軟骨%TGF-β1
각취당-사소%지가%골수간충질간세포%연골%TGF-β1
目的 研制负载转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)壳聚糖微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外构建组织工程软骨,观察将其移植修复兔膝关节软骨缺损的效果.方法 通过密度梯度离心法及贴壁培养法分离纯化MSCs,以抗兔CD14、CD44等单抗采用流式细胞仪进行MSCs表面抗原鉴定,获得纯化的MSCs.采用乳化交联法获得包裹TGF-β1壳聚糖缓释微球,并将该微球负载在冷冻干燥获得的壳聚糖-丝素支架上.将培养的MSCs种植到支架上,体外构建组织工程软骨,移植到兔关节软骨缺损处.移植空白支架的为实验对照组,移植体外构建的组织工程软骨为实验组.主要观察指标,流式检测的MSCs细胞表面标记情况,微球的形态,支架与细胞共培养后电镜下情况,支架移植后的兔关节修复情况及组织学检查.结果 流式检测MSCs第4代及第9代细胞的CD14及CD44表面抗原的表达情况发现两代MSCs CD14表达基本呈阴性,CD44表达呈阳性,符合间充质干细胞的特性.扫描电镜观察所制备的微球基本呈球形,表面光滑,直径约为1μm,大小较均一,分散度好.细胞在壳聚糖-丝素三维支架上生长状态良好,电镜观察,可见支架孔隙内有细胞黏附生长.移植治疗后发现实验组修复明显好于对照组,实验组术后3个月实验组已经有较硬的类软骨组织填充修复,切片显示有软骨细胞规则排列,甲苯胺蓝染色为阳性,而对照组仅为纤维组织修复,切片显示为纤维组织或纤维软骨组织修复,软骨细胞排列紊乱,甲苯胺蓝染色阴性或弱阳性.结论 负载TGF-β1壳聚糖微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞体外复合培养后移植治疗修复兔膝关节软骨缺损,具有较好的疗效.
目的 研製負載轉化生長因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)殼聚糖微毬的殼聚糖-絲素支架複閤骨髓間充質榦細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)體外構建組織工程軟骨,觀察將其移植脩複兔膝關節軟骨缺損的效果.方法 通過密度梯度離心法及貼壁培養法分離純化MSCs,以抗兔CD14、CD44等單抗採用流式細胞儀進行MSCs錶麵抗原鑒定,穫得純化的MSCs.採用乳化交聯法穫得包裹TGF-β1殼聚糖緩釋微毬,併將該微毬負載在冷凍榦燥穫得的殼聚糖-絲素支架上.將培養的MSCs種植到支架上,體外構建組織工程軟骨,移植到兔關節軟骨缺損處.移植空白支架的為實驗對照組,移植體外構建的組織工程軟骨為實驗組.主要觀察指標,流式檢測的MSCs細胞錶麵標記情況,微毬的形態,支架與細胞共培養後電鏡下情況,支架移植後的兔關節脩複情況及組織學檢查.結果 流式檢測MSCs第4代及第9代細胞的CD14及CD44錶麵抗原的錶達情況髮現兩代MSCs CD14錶達基本呈陰性,CD44錶達呈暘性,符閤間充質榦細胞的特性.掃描電鏡觀察所製備的微毬基本呈毬形,錶麵光滑,直徑約為1μm,大小較均一,分散度好.細胞在殼聚糖-絲素三維支架上生長狀態良好,電鏡觀察,可見支架孔隙內有細胞黏附生長.移植治療後髮現實驗組脩複明顯好于對照組,實驗組術後3箇月實驗組已經有較硬的類軟骨組織填充脩複,切片顯示有軟骨細胞規則排列,甲苯胺藍染色為暘性,而對照組僅為纖維組織脩複,切片顯示為纖維組織或纖維軟骨組織脩複,軟骨細胞排列紊亂,甲苯胺藍染色陰性或弱暘性.結論 負載TGF-β1殼聚糖微毬的殼聚糖-絲素支架複閤骨髓間充質榦細胞體外複閤培養後移植治療脩複兔膝關節軟骨缺損,具有較好的療效.
목적 연제부재전화생장인자β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)각취당미구적각취당-사소지가복합골수간충질간세포(mesenchymal stem cells,MSCs)체외구건조직공정연골,관찰장기이식수복토슬관절연골결손적효과.방법 통과밀도제도리심법급첩벽배양법분리순화MSCs,이항토CD14、CD44등단항채용류식세포의진행MSCs표면항원감정,획득순화적MSCs.채용유화교련법획득포과TGF-β1각취당완석미구,병장해미구부재재냉동간조획득적각취당-사소지가상.장배양적MSCs충식도지가상,체외구건조직공정연골,이식도토관절연골결손처.이식공백지가적위실험대조조,이식체외구건적조직공정연골위실험조.주요관찰지표,류식검측적MSCs세포표면표기정황,미구적형태,지가여세포공배양후전경하정황,지가이식후적토관절수복정황급조직학검사.결과 류식검측MSCs제4대급제9대세포적CD14급CD44표면항원적표체정황발현량대MSCs CD14표체기본정음성,CD44표체정양성,부합간충질간세포적특성.소묘전경관찰소제비적미구기본정구형,표면광활,직경약위1μm,대소교균일,분산도호.세포재각취당-사소삼유지가상생장상태량호,전경관찰,가견지가공극내유세포점부생장.이식치료후발현실험조수복명현호우대조조,실험조술후3개월실험조이경유교경적류연골조직전충수복,절편현시유연골세포규칙배렬,갑분알람염색위양성,이대조조부위섬유조직수복,절편현시위섬유조직혹섬유연골조직수복,연골세포배렬문란,갑분알람염색음성혹약양성.결론 부재TGF-β1각취당미구적각취당-사소지가복합골수간충질간세포체외복합배양후이식치료수복토슬관절연골결손,구유교호적료효.
