医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2011年
6期
35-38
,共4页
戴大鹏%干伟%张立群%聂犇%徐仁爱%蔡剑平
戴大鵬%榦偉%張立群%聶犇%徐仁愛%蔡劍平
대대붕%간위%장립군%섭분%서인애%채검평
8-oxoG%RNA%干扰%MTH1
8-oxoG%RNA%榦擾%MTH1
8-oxoG%RNA%간우%MTH1
目的 建立敲减MTH1基因的HeLa细胞稳定细胞株,研究MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响.方法 设计并合成针对MTH1基因的3条siRNA,分别转染HeLa细胞,选择干扰效果最为理想的靶序列连接入反转录病毒载体Retro-Q,在293T细胞内包装病毒颗粒,将病毒转染HeLa细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性克隆株,用western blot技术检测克隆株的MTH1的表达量以确定干扰效果最理想的稳定细胞株,用AP15000型质谱仪检测稳定细胞株RNA中的8-oxoG与G的含量以评价RNA的氧化程度.结果 本研究设计的3条siRNA中有2条干扰效率可达90%以上,所建立的敲减MTH1基因HeLa细胞稳定细胞株的干扰效果达80%以上,质谱检测结果表明MTH1基因低表达的稳定细胞株每106个G中含有14.9个8-oxoG,而对照细胞中则仅含9.7个8-oxoG.结论 MTH1基因的低表达可引起HeLa细胞中RNA氧化程度明显升高.
目的 建立敲減MTH1基因的HeLa細胞穩定細胞株,研究MTH1基因的低錶達對HeLa細胞內RNA氧化程度的影響.方法 設計併閤成針對MTH1基因的3條siRNA,分彆轉染HeLa細胞,選擇榦擾效果最為理想的靶序列連接入反轉錄病毒載體Retro-Q,在293T細胞內包裝病毒顆粒,將病毒轉染HeLa細胞後使用嘌呤黴素篩選抗性剋隆株,用western blot技術檢測剋隆株的MTH1的錶達量以確定榦擾效果最理想的穩定細胞株,用AP15000型質譜儀檢測穩定細胞株RNA中的8-oxoG與G的含量以評價RNA的氧化程度.結果 本研究設計的3條siRNA中有2條榦擾效率可達90%以上,所建立的敲減MTH1基因HeLa細胞穩定細胞株的榦擾效果達80%以上,質譜檢測結果錶明MTH1基因低錶達的穩定細胞株每106箇G中含有14.9箇8-oxoG,而對照細胞中則僅含9.7箇8-oxoG.結論 MTH1基因的低錶達可引起HeLa細胞中RNA氧化程度明顯升高.
목적 건립고감MTH1기인적HeLa세포은정세포주,연구MTH1기인적저표체대HeLa세포내RNA양화정도적영향.방법 설계병합성침대MTH1기인적3조siRNA,분별전염HeLa세포,선택간우효과최위이상적파서렬련접입반전록병독재체Retro-Q,재293T세포내포장병독과립,장병독전염HeLa세포후사용표령매소사선항성극륭주,용western blot기술검측극륭주적MTH1적표체량이학정간우효과최이상적은정세포주,용AP15000형질보의검측은정세포주RNA중적8-oxoG여G적함량이평개RNA적양화정도.결과 본연구설계적3조siRNA중유2조간우효솔가체90%이상,소건립적고감MTH1기인HeLa세포은정세포주적간우효과체80%이상,질보검측결과표명MTH1기인저표체적은정세포주매106개G중함유14.9개8-oxoG,이대조세포중칙부함9.7개8-oxoG.결론 MTH1기인적저표체가인기HeLa세포중RNA양화정도명현승고.
