CAJ | 학술논문

RNAi(RNAinterference,RNAi)是继基因打靶技术后的一种高效的研究基因功能的方法.细胞学实验和小鼠模型的研究结果表明,Pol Ⅱ型启动子可以实现组织特异的RNA干扰,从而为鉴定基因在特定组织中的功能及作用机理提供了一个强有力的研究方法.为了能将这种方法用于转基因绵羊生产,探讨基因与绵羊毛囊发育的关系及其作用机制等,文章利用Pol Ⅱ型CMV启动子和毛囊组织特异表达的人角蛋白14(K14)基因的启动子驱动eGFP-shRNA融合转录本的生成,从而实现敲低目的基因的表达.体外基因表达沉默效率分析(pEGFPC1-shRNA和psiCHECK-BMP4双质粒共转染Hela细胞)结果表明,6个干扰序列均能有效地抑制BMP4基因的表达,抑制效率达到60%以上;体内表达沉默分析(只转染pEGFP-K14-shRNA质粒转染小鼠皮肤细胞系JB6-C41)的实验结果与体外分析结果相似,除3#序列外,其余干扰序列对BMP4基因的抑制效率都在60%以上,其中5#序列的效率达到80%以上.siRNA诱导的目标基因沉默中mRNA和蛋白水平的下降显著正相关.结果表明,设计构建的由Pol Ⅱ型启动子K14驱动eGFP-shRNA融合转录本的形成,从而实现RNAi的研究方法是可行的,利用这种方法可以实现在特定细胞中敲低目的基因的表达水平.为在大家畜特别是绵羊中应用RNAi的方法分析目的基因在毛囊发育、对不同类型毛囊生长发育的诱导和调节等作用机理的研究提供一个参考方法.
RNAi(RNAinterference,RNAi)시계기인타파기술후적일충고효적연구기인공능적방법.세포학실험화소서모형적연구결과표명,Pol Ⅱ형계동자가이실현조직특이적RNA간우,종이위감정기인재특정조직중적공능급작용궤리제공료일개강유력적연구방법.위료능장저충방법용우전기인면양생산,탐토기인여면양모낭발육적관계급기작용궤제등,문장이용Pol Ⅱ형CMV계동자화모낭조직특이표체적인각단백14(K14)기인적계동자구동eGFP-shRNA융합전록본적생성,종이실현고저목적기인적표체.체외기인표체침묵효솔분석(pEGFPC1-shRNA화psiCHECK-BMP4쌍질립공전염Hela세포)결과표명,6개간우서렬균능유효지억제BMP4기인적표체,억제효솔체도60%이상;체내표체침묵분석(지전염pEGFP-K14-shRNA질립전염소서피부세포계JB6-C41)적실험결과여체외분석결과상사,제3#서렬외,기여간우서렬대BMP4기인적억제효솔도재60%이상,기중5#서렬적효솔체도80%이상.siRNA유도적목표기인침묵중mRNA화단백수평적하강현저정상관.결과표명,설계구건적유Pol Ⅱ형계동자K14구동eGFP-shRNA융합전록본적형성,종이실현RNAi적연구방법시가행적,이용저충방법가이실현재특정세포중고저목적기인적표체수평.위재대가축특별시면양중응용RNAi적방법분석목적기인재모낭발육、대불동류형모낭생장발육적유도화조절등작용궤리적연구제공일개삼고방법.