安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2013年
8期
867-872
,共6页
吴莉莉%祁培培%章萍萍%王锦红%张婧%何婷%潘卫%邓松华
吳莉莉%祁培培%章萍萍%王錦紅%張婧%何婷%潘衛%鄧鬆華
오리리%기배배%장평평%왕금홍%장청%하정%반위%산송화
细菌噬菌体%免疫球蛋白G%定向分子进化%基因文库
細菌噬菌體%免疫毬蛋白G%定嚮分子進化%基因文庫
세균서균체%면역구단백G%정향분자진화%기인문고
bacteriophages%immunoglobulin G%directed molecular evolution%gene library
目的 使用人和羊不同物种IgG来诱导噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同的Fc段构像是否具有特异的结合优势,同时探索其优势结合序列的组合特点.方法 通过PCR获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的A、B、D、E和链球菌(C和G群)蛋白G (SpG)的B2、B3各单结构域片段,构建由该6个片段随机组合的噬菌体展示文库.再分别使用人和羊IgG对文库进行体外亲和筛选,以期能够获得具有特异优势结合能力的组合分子,并在Phage ELISA的水平上进一步验证筛选结果.结果 成功构建了符合进行体外进化筛选要求的噬菌体展示单结合结构域随机组合文库后,经过6轮人IgG诱导筛选,文库的展示片段大小统一为3个结构域组合分子,E-B-B3;经过6轮羊IgG诱导筛选,文库的展示片段大小也统一为4个结构域组合分子,D-A-B3-B3.Phage ELISA进一步验证最终组合序列的对人和羊IgG的结合能力.结论 首次得到两种天然SpA、SpG分子中不存在的,且分别特异地与人和羊IgG具有强结合作用的新型组合分子E-B-B3、D-A-B3-B3,在人和羊IgG的纯化和检测具有很大的应用前景.
目的 使用人和羊不同物種IgG來誘導噬菌體展示免疫毬蛋白結閤分子單結構域隨機組閤文庫進行體外分子進化篩選,判斷不同的Fc段構像是否具有特異的結閤優勢,同時探索其優勢結閤序列的組閤特點.方法 通過PCR穫得金黃色葡萄毬菌蛋白A(SpA)的A、B、D、E和鏈毬菌(C和G群)蛋白G (SpG)的B2、B3各單結構域片段,構建由該6箇片段隨機組閤的噬菌體展示文庫.再分彆使用人和羊IgG對文庫進行體外親和篩選,以期能夠穫得具有特異優勢結閤能力的組閤分子,併在Phage ELISA的水平上進一步驗證篩選結果.結果 成功構建瞭符閤進行體外進化篩選要求的噬菌體展示單結閤結構域隨機組閤文庫後,經過6輪人IgG誘導篩選,文庫的展示片段大小統一為3箇結構域組閤分子,E-B-B3;經過6輪羊IgG誘導篩選,文庫的展示片段大小也統一為4箇結構域組閤分子,D-A-B3-B3.Phage ELISA進一步驗證最終組閤序列的對人和羊IgG的結閤能力.結論 首次得到兩種天然SpA、SpG分子中不存在的,且分彆特異地與人和羊IgG具有彊結閤作用的新型組閤分子E-B-B3、D-A-B3-B3,在人和羊IgG的純化和檢測具有很大的應用前景.
목적 사용인화양불동물충IgG래유도서균체전시면역구단백결합분자단결구역수궤조합문고진행체외분자진화사선,판단불동적Fc단구상시부구유특이적결합우세,동시탐색기우세결합서렬적조합특점.방법 통과PCR획득금황색포도구균단백A(SpA)적A、B、D、E화련구균(C화G군)단백G (SpG)적B2、B3각단결구역편단,구건유해6개편단수궤조합적서균체전시문고.재분별사용인화양IgG대문고진행체외친화사선,이기능구획득구유특이우세결합능력적조합분자,병재Phage ELISA적수평상진일보험증사선결과.결과 성공구건료부합진행체외진화사선요구적서균체전시단결합결구역수궤조합문고후,경과6륜인IgG유도사선,문고적전시편단대소통일위3개결구역조합분자,E-B-B3;경과6륜양IgG유도사선,문고적전시편단대소야통일위4개결구역조합분자,D-A-B3-B3.Phage ELISA진일보험증최종조합서렬적대인화양IgG적결합능력.결론 수차득도량충천연SpA、SpG분자중불존재적,차분별특이지여인화양IgG구유강결합작용적신형조합분자E-B-B3、D-A-B3-B3,재인화양IgG적순화화검측구유흔대적응용전경.
