天津医科大学学报
天津醫科大學學報
천진의과대학학보
JOURNAL OF TIANJIN MEDICAL UNIVERSITY
2014年
3期
184-187
,共4页
牛健%于晓旭%李雪%鲍会静%刘运德
牛健%于曉旭%李雪%鮑會靜%劉運德
우건%우효욱%리설%포회정%류운덕
CARDsTX%质粒构建%点突变%蛋白纯化%蛋白复性
CARDsTX%質粒構建%點突變%蛋白純化%蛋白複性
CARDsTX%질립구건%점돌변%단백순화%단백복성
CARDs TX%plasmid construction%point mutation%protein purification%protein renaturation
目的:构建pET28α-CARDs TX重组质粒,诱导CARDs TX融合蛋白表达,并对其进行纯化与复性研究.方法:将CARDsTX基因(MPN 372)克隆入pET28α载体,经8次点突变获得pET28α-CARDs TX重组质粒.转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达.利用亲和层析技术纯化蛋白并通过SDS-PAGE和Western blot检测CARDs TX的表达和纯化效果.利用尿素梯度复性法和扩大体积透析法对蛋白进行复性研究.结果:酶切和测序结果证明pET28α-CARDs TX重组质粒的DNA序列完全正确,在BL21中CARDsTX融合蛋白可高效表达,并可获得高纯度目的蛋白.利用扩大体积透析法对目的蛋白复性有较好的效果.结论:成功构建出pET28α-CARDs TX重组质粒,且CARDs TX可在大肠杆菌中高效表达,并可获得高纯度的目的蛋白,为深入研究CARDs TX的生物学特性奠定了基础
目的:構建pET28α-CARDs TX重組質粒,誘導CARDs TX融閤蛋白錶達,併對其進行純化與複性研究.方法:將CARDsTX基因(MPN 372)剋隆入pET28α載體,經8次點突變穫得pET28α-CARDs TX重組質粒.轉化大腸桿菌BL21,IPTG誘導錶達.利用親和層析技術純化蛋白併通過SDS-PAGE和Western blot檢測CARDs TX的錶達和純化效果.利用尿素梯度複性法和擴大體積透析法對蛋白進行複性研究.結果:酶切和測序結果證明pET28α-CARDs TX重組質粒的DNA序列完全正確,在BL21中CARDsTX融閤蛋白可高效錶達,併可穫得高純度目的蛋白.利用擴大體積透析法對目的蛋白複性有較好的效果.結論:成功構建齣pET28α-CARDs TX重組質粒,且CARDs TX可在大腸桿菌中高效錶達,併可穫得高純度的目的蛋白,為深入研究CARDs TX的生物學特性奠定瞭基礎
목적:구건pET28α-CARDs TX중조질립,유도CARDs TX융합단백표체,병대기진행순화여복성연구.방법:장CARDsTX기인(MPN 372)극륭입pET28α재체,경8차점돌변획득pET28α-CARDs TX중조질립.전화대장간균BL21,IPTG유도표체.이용친화층석기술순화단백병통과SDS-PAGE화Western blot검측CARDs TX적표체화순화효과.이용뇨소제도복성법화확대체적투석법대단백진행복성연구.결과:매절화측서결과증명pET28α-CARDs TX중조질립적DNA서렬완전정학,재BL21중CARDsTX융합단백가고효표체,병가획득고순도목적단백.이용확대체적투석법대목적단백복성유교호적효과.결론:성공구건출pET28α-CARDs TX중조질립,차CARDs TX가재대장간균중고효표체,병가획득고순도적목적단백,위심입연구CARDs TX적생물학특성전정료기출
