生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2013年
3期
223-229
,共7页
曾婷%何志敏%段桂芳%赵小英%唐冬英%刘选明
曾婷%何誌敏%段桂芳%趙小英%唐鼕英%劉選明
증정%하지민%단계방%조소영%당동영%류선명
酵母双杂交%CRY1%转录因子%蓝光响应%蛋白质相互作用
酵母雙雜交%CRY1%轉錄因子%藍光響應%蛋白質相互作用
효모쌍잡교%CRY1%전록인자%람광향응%단백질상호작용
yeast 2-hybrid analysis%CRY1%HB22%signal transformation of blue light%protein-protein interaction
通过酵母双杂交的方法,从拟南芥转录因子库中筛选出了6个与CRY1相互作用的转录因子.为了测定其中的HB22与CRY1相互作用的强度,采用了ONPG与CPRG两种方法对其β-半乳糖苷酶活性进行了分析.结果显示在蓝光光强为50μmol/m2s,孵育时间为4h的情况下,蓝光与暗处理情况下的β-半乳糖苷酶活性比值分别为1.668和2.18.进一步设置蓝光处理时间及光强梯度实验数据显示,在蓝光光强为50 μmol/m2s孵育时间为3h时,二者相互作用强度达到最高.说明HB22与CRY1的相互作用具有蓝光响应.对蓝光处理不同时间的野生型col-4与cry1缺失突变体的材料进行HB22基因的定量PCR分析,发现拟南芥cry1缺失突变体中该基因的表达量比野生型中高,在蓝光处理2h时,缺失突变体中表达量为野生型中的6倍左右.说明CRY1可能介导蓝光抑制HB22基因表达.
通過酵母雙雜交的方法,從擬南芥轉錄因子庫中篩選齣瞭6箇與CRY1相互作用的轉錄因子.為瞭測定其中的HB22與CRY1相互作用的彊度,採用瞭ONPG與CPRG兩種方法對其β-半乳糖苷酶活性進行瞭分析.結果顯示在藍光光彊為50μmol/m2s,孵育時間為4h的情況下,藍光與暗處理情況下的β-半乳糖苷酶活性比值分彆為1.668和2.18.進一步設置藍光處理時間及光彊梯度實驗數據顯示,在藍光光彊為50 μmol/m2s孵育時間為3h時,二者相互作用彊度達到最高.說明HB22與CRY1的相互作用具有藍光響應.對藍光處理不同時間的野生型col-4與cry1缺失突變體的材料進行HB22基因的定量PCR分析,髮現擬南芥cry1缺失突變體中該基因的錶達量比野生型中高,在藍光處理2h時,缺失突變體中錶達量為野生型中的6倍左右.說明CRY1可能介導藍光抑製HB22基因錶達.
통과효모쌍잡교적방법,종의남개전록인자고중사선출료6개여CRY1상호작용적전록인자.위료측정기중적HB22여CRY1상호작용적강도,채용료ONPG여CPRG량충방법대기β-반유당감매활성진행료분석.결과현시재람광광강위50μmol/m2s,부육시간위4h적정황하,람광여암처리정황하적β-반유당감매활성비치분별위1.668화2.18.진일보설치람광처리시간급광강제도실험수거현시,재람광광강위50 μmol/m2s부육시간위3h시,이자상호작용강도체도최고.설명HB22여CRY1적상호작용구유람광향응.대람광처리불동시간적야생형col-4여cry1결실돌변체적재료진행HB22기인적정량PCR분석,발현의남개cry1결실돌변체중해기인적표체량비야생형중고,재람광처리2h시,결실돌변체중표체량위야생형중적6배좌우.설명CRY1가능개도람광억제HB22기인표체.
