军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2013年
6期
427-430,434
,共5页
代学强%刘勇%吴昊%车薇%高慧英%赛岩%吴飞林%周旭%崔春萍
代學彊%劉勇%吳昊%車薇%高慧英%賽巖%吳飛林%週旭%崔春萍
대학강%류용%오호%차미%고혜영%새암%오비림%주욱%최춘평
肝细胞生成素Cn%方阵滴定法%双抗体夹心%包被抗体%酶标抗体
肝細胞生成素Cn%方陣滴定法%雙抗體夾心%包被抗體%酶標抗體
간세포생성소Cn%방진적정법%쌍항체협심%포피항체%매표항체
hepatopoietin Cn%square matrix titrimetry%double antibody sandwich%coating antibodies%enzyme labeled antibodies
目的 建立定量检测肝细胞生成素Cn (HPPCn)的双抗体夹心ELISA方法.方法 利用杂交瘤方法获得8个抗HPPCn单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western印迹对纯化抗体特性进行鉴定.利用镀金芯片法对8个抗体进行配对检测.通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度.以纯化的HPPCn抗原为标准品建立标准曲线.结果 得到了8株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株,分别为Ab 65-29-6,Ab_3-3-3,Ab_9-34-1,Ab_4-8-12,Ab_7-8-10,Ab_2-30-23,Ab_1 1-11-12和Ab_12-27-23.8个抗体均能够特异结合HPPCn抗原,其中Ab_65-29-6与细胞中HPPCn结合的特异性最好.经抗体配对检测证实最佳配对组合为:Ab_2-30-23和Ab_4-8-12.包被抗体Ab_2-30-23和识别抗体Ab 4-8-12的最适工作浓度为2.5 μg/ml,最适稀释度为1∶2000,标准曲线检测的线性范围为5.0～60 ng/ml.结论 制备了可特异性检测人HPPCn蛋白的单克隆抗体,并建立了一种可用于定量检测人HPPCn的双抗体夹心ELISA方法.
目的 建立定量檢測肝細胞生成素Cn (HPPCn)的雙抗體夾心ELISA方法.方法 利用雜交瘤方法穫得8箇抗HPPCn單剋隆抗體(mAb),併行SDS-PAGE和Western印跡對純化抗體特性進行鑒定.利用鍍金芯片法對8箇抗體進行配對檢測.通過方陣滴定法確定包被抗體和酶標抗體的最適工作濃度.以純化的HPPCn抗原為標準品建立標準麯線.結果 得到瞭8株穩定分泌抗人HPPCn抗體的雜交瘤細胞株,分彆為Ab 65-29-6,Ab_3-3-3,Ab_9-34-1,Ab_4-8-12,Ab_7-8-10,Ab_2-30-23,Ab_1 1-11-12和Ab_12-27-23.8箇抗體均能夠特異結閤HPPCn抗原,其中Ab_65-29-6與細胞中HPPCn結閤的特異性最好.經抗體配對檢測證實最佳配對組閤為:Ab_2-30-23和Ab_4-8-12.包被抗體Ab_2-30-23和識彆抗體Ab 4-8-12的最適工作濃度為2.5 μg/ml,最適稀釋度為1∶2000,標準麯線檢測的線性範圍為5.0～60 ng/ml.結論 製備瞭可特異性檢測人HPPCn蛋白的單剋隆抗體,併建立瞭一種可用于定量檢測人HPPCn的雙抗體夾心ELISA方法.
목적 건립정량검측간세포생성소Cn (HPPCn)적쌍항체협심ELISA방법.방법 이용잡교류방법획득8개항HPPCn단극륭항체(mAb),병행SDS-PAGE화Western인적대순화항체특성진행감정.이용도금심편법대8개항체진행배대검측.통과방진적정법학정포피항체화매표항체적최괄공작농도.이순화적HPPCn항원위표준품건립표준곡선.결과 득도료8주은정분비항인HPPCn항체적잡교류세포주,분별위Ab 65-29-6,Ab_3-3-3,Ab_9-34-1,Ab_4-8-12,Ab_7-8-10,Ab_2-30-23,Ab_1 1-11-12화Ab_12-27-23.8개항체균능구특이결합HPPCn항원,기중Ab_65-29-6여세포중HPPCn결합적특이성최호.경항체배대검측증실최가배대조합위:Ab_2-30-23화Ab_4-8-12.포피항체Ab_2-30-23화식별항체Ab 4-8-12적최괄공작농도위2.5 μg/ml,최괄희석도위1∶2000,표준곡선검측적선성범위위5.0～60 ng/ml.결론 제비료가특이성검측인HPPCn단백적단극륭항체,병건립료일충가용우정량검측인HPPCn적쌍항체협심ELISA방법.
