中国医药工业杂志
中國醫藥工業雜誌
중국의약공업잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACEUTICALS
2014年
6期
525-530
,共6页
张琪%胡又佳%陈习平%谢丽萍
張琪%鬍又佳%陳習平%謝麗萍
장기%호우가%진습평%사려평
菌丝霉素%易错PCR%体外进化%抑菌活性
菌絲黴素%易錯PCR%體外進化%抑菌活性
균사매소%역착PCR%체외진화%억균활성
plectasin%error-prone PCR%in vitro evolution%antibacterial activity
以菌丝霉素成熟肽经大肠杆菌密码子优化后的基因为基础,采用易错PCR技术,使用低保真的Taq酶,调整Mg2+浓度、添加Mn2+,改变PCR扩增程序,获得易错PCR产物.经克隆、转化后,挑取200株突变体进行测序鉴定,并进行抑菌活性筛选,筛得突变体M-1.基因比对结果显示,突变体M-1中有1个碱基发生突变,使得31位氨基酸由丙氨酸(Ala)变成精氨酸(Arg).蛋白质分子空间结构模拟显示,突变位点位于蛋白质的β折叠上,靠近活性中心,氨基酸残基由疏水性变成极性,推测更有利于与lipid Ⅱ的特异性结合,增强抑菌活性.本研究还对突变体小肽M-1进行了分离纯化.抑菌活性试验表明,突变体小肽M-1的抑菌活性是菌丝霉素的2倍.
以菌絲黴素成熟肽經大腸桿菌密碼子優化後的基因為基礎,採用易錯PCR技術,使用低保真的Taq酶,調整Mg2+濃度、添加Mn2+,改變PCR擴增程序,穫得易錯PCR產物.經剋隆、轉化後,挑取200株突變體進行測序鑒定,併進行抑菌活性篩選,篩得突變體M-1.基因比對結果顯示,突變體M-1中有1箇堿基髮生突變,使得31位氨基痠由丙氨痠(Ala)變成精氨痠(Arg).蛋白質分子空間結構模擬顯示,突變位點位于蛋白質的β摺疊上,靠近活性中心,氨基痠殘基由疏水性變成極性,推測更有利于與lipid Ⅱ的特異性結閤,增彊抑菌活性.本研究還對突變體小肽M-1進行瞭分離純化.抑菌活性試驗錶明,突變體小肽M-1的抑菌活性是菌絲黴素的2倍.
이균사매소성숙태경대장간균밀마자우화후적기인위기출,채용역착PCR기술,사용저보진적Taq매,조정Mg2+농도、첨가Mn2+,개변PCR확증정서,획득역착PCR산물.경극륭、전화후,도취200주돌변체진행측서감정,병진행억균활성사선,사득돌변체M-1.기인비대결과현시,돌변체M-1중유1개감기발생돌변,사득31위안기산유병안산(Ala)변성정안산(Arg).단백질분자공간결구모의현시,돌변위점위우단백질적β절첩상,고근활성중심,안기산잔기유소수성변성겁성,추측경유리우여lipid Ⅱ적특이성결합,증강억균활성.본연구환대돌변체소태M-1진행료분리순화.억균활성시험표명,돌변체소태M-1적억균활성시균사매소적2배.
